蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞,，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過(guò)瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白,。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）,。

3.通過(guò)親和，離子交換,，疏水及凝膠過(guò)濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

4.通過(guò)SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量,。

5.通過(guò)Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性,。

交付內(nèi)容：純化好的目標(biāo)蛋白及純化報(bào)告?？砂纯蛻?hù)要求提供含純化標(biāo)簽（Tag）或切除純化標(biāo)簽（Tag）的最終蛋白,，純度最高可達(dá)90%以上。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱(chēng)：神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)重組蛋白小鼠

英文名稱(chēng)：Recombinant Enolase, Neuron Specific (NSE)

ENO2; Enolase 2; Gamma Enolase; 2-phospho-D-glycerate hydro-lyase; Neural enolase

型號(hào)：GOY-01D217

酶與激酶

腫瘤免疫

感染免疫

神經(jīng)科學(xué)

物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)

來(lái)源：原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)

亞細(xì)胞定位：：n/a

預(yù)測(cè)分子量：36.1kDa

實(shí)際分子量：37kDa(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書(shū))

片段與標(biāo)簽：Met1~Ser104 linked with Leu224~Leu434 with N-terminal His Tag

緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4,，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

性狀：凍干粉

純度：> 90%

等電點(diǎn)：5.2

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相關(guān)產(chǎn)品：

英文名稱(chēng)：Recombinant Lactoperoxidase (LPO)  產(chǎn)品名稱(chēng)：乳過(guò)氧化物酶(LPO)重組蛋白物種：Rattus norvegicus (Rat,，大鼠)

英文名稱(chēng)：Recombinant Peroxiredoxin 2 (PRDX2)  產(chǎn)品名稱(chēng)：過(guò)氧化還原酶2(PRDX2)重組蛋白物種：Rattus norvegicus (Rat，大鼠)

英文名稱(chēng)：Recombinant Ubiquitin Carboxyl Terminal Hydrolase L5 (UCHL5)  產(chǎn)品名稱(chēng)：泛素羧基端酯酶L5(UCHL5)重組蛋白物種：Bos taurus; Bovine (Cattle,，牛)

英文名稱(chēng)：Recombinant Fatty Acid Synthase (FASN)  產(chǎn)品名稱(chēng)：脂肪酸合酶(FASN)重組蛋白物種：Chicken (Gallus,，雞)

英文名稱(chēng)：Recombinant Dihydrolipoyl Transacetylase (DLAT)  產(chǎn)品名稱(chēng)：二氫轉(zhuǎn)乙酰基酶(DLAT)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human,，人)

英文名稱(chēng)：Recombinant Interleukin 1 Receptor Associated Kinase 2 (IRAK2)  產(chǎn)品名稱(chēng)：白介素1受體關(guān)聯(lián)激酶2(IRAK2)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human,，人)

操作步驟：

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,，剪碎成3mm×3mm左右的小塊,，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次,，注意低溫操作,；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分,，4℃離心5 min,；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物,，蛋白定量（Bradford法,、BCA法）,；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,，吸去培養(yǎng)基后,，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

4． 細(xì)胞洗滌后,，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer,，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺(tái)上,，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm,，4℃離心15min,，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）,；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融,。

公司正在出售的產(chǎn)品：

磷酸化鈣調(diào)節(jié)素抗體 phospho-CaM I (Ser 102)

12號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框54抗體 C12ORF54

細(xì)胞分裂相關(guān)蛋白CSTF64抗體 CstF-64

磷酸化細(xì)胞分裂相關(guān)蛋白CSTF64抗體 phospho-CstF64 (Ser83)

磷酸化細(xì)胞分裂相關(guān)蛋白CSTF64抗體 phospho-CstF64(Ser498)

CD3抗體 CD3E

CD4抗體 CD4

白細(xì)胞共同抗原抗體 CD45

白細(xì)胞共同抗原抗體 CD45

間隙連接蛋白36抗體 Connexin-36

白細(xì)胞共同抗原抗體 CD45

12號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框61抗體 C12ORF61

神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)重組蛋白小鼠可視型中分子量蛋白Marker酸球菌脂亞種 Lactococcus lactis subsp. cremoris

Ca Ski, 人宮頸細(xì)胞串珠菌 Leuconostoc lactis

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum貴州青霉 Promicromonospora sp.

蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液-BSA三葉草根瘤菌 Rhizobium trifolii

NCI-H596(人肺腺鱗細(xì)胞)膠凍樣芽胞桿菌 Bacillus mucilaginosus

RGC-5, 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞HKC(人胚腎上皮細(xì)胞)

酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

ARPE-19(人視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞)釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

蘇云金芽孢桿菌肯尼亞亞種 Bacillus thuringiensis subsp. Kenyae鼠傷 Salmonella typhimurium

小鼠骨髓瘤淋巴細(xì)胞苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti

MGC80-3（MGC-803）人胃細(xì)胞大麗輪枝菌 Verticillium dahliea Kleb

小鼠支氣管成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基大鼠成肌細(xì)胞

植物桿菌 Lactobacillus plantarumHGC-27人胃細(xì)胞