詳細(xì)介紹
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產(chǎn)品名稱:抗壞血酸氧化酶(AAO)微量法測(cè)試盒
規(guī)格 : 100管/96樣
測(cè)試方法: 微量法
貨號(hào):GOY-01S6394
分類:維生素代謝系列
商品介紹:
AAO是定位于植物細(xì)胞壁的糖蛋白,,屬“藍(lán)銅氧化酶"家族,。細(xì)胞壁內(nèi)的抗壞血酸和AAO與細(xì)胞壁的代謝和生長(zhǎng)有著密切的聯(lián)系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通過(guò)質(zhì)膜上的細(xì)胞色素b還原,,該過(guò)程中電子的跨膜運(yùn)輸能夠促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng),。
測(cè)定原理:
AAO可直接氧化AsA,通過(guò)測(cè)定AsA的氧化量,,可計(jì)算得AAO活力,。
實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備:
低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、微量石英比色皿/96孔板,、可調(diào)式移液器、研缽,、冰,、蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,,4℃保存,。
提取液二:液體50mL×1瓶,4℃保存,。
試劑一:粉劑×1瓶,,-20℃保存;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,,用不完的試劑4℃保存,;
試劑二:液體18μL×1瓶,4℃保存,;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,,用不完的試劑4℃保存,;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存,;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存,;
試劑四:液體50mL×1瓶,, 4℃保存;
測(cè)定步驟
1,、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零,。
2,、 將試劑一、二,、三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘,。
3、 加樣表:
樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本,,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,,200W,,破碎3s,間歇7s,,總時(shí)間1min),,然后4℃,8000g離心10min,,取上清測(cè)定,。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),,冰浴勻漿后于4℃,,200g離心5min,棄沉淀,,取上清在4℃,,8000g離心10min,取上清用于測(cè)定胞漿FBP酶活性,,取沉淀加1mL提取液二,,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,,破碎3s,,間歇7s,,總時(shí)間1min),然后4℃,,8000g離心10min,,取上清測(cè)定葉綠體中FBP酶活性。
建議測(cè)定總FBP酶活性,,按照步驟①提取粗酶液,,若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液,。
β1,,3半乳糖轉(zhuǎn)移酶3抗體 胰島素樣生長(zhǎng)因子ⅡmRNA結(jié)合蛋白1抗體
BarX1蛋白抗體 胰島素樣生長(zhǎng)因子2受體抗體
Bcl-2同源結(jié)構(gòu)域樣蛋白1抗體 胰島素樣生長(zhǎng)因子2 mRNA 結(jié)合蛋白3抗體
染色體相關(guān)蛋白CAP抗體 胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體相互作用蛋白1抗體
骨/軟骨蛋白多糖1抗體 胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體抗體
大鼠環(huán)孢素A(CsA)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠環(huán)加氧酶1(COX-1)elisa分析檢測(cè)試劑盒
大鼠環(huán)加氧酶1(COX-1)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠環(huán)加氧酶1(PTGS1)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠環(huán)加氧酶2(COX-2)elisa分析檢測(cè)試劑盒
抗壞血酸氧化酶(AAO)微量法測(cè)試盒一站式蛋白質(zhì)非變性 PAGE 套裝 ( 中 pH)30 次 IPTG 干粉2.5g
一站式蛋白質(zhì)非變性 PAGE 套裝 ( 低 pH)30 次 Ionomycin( 鈣離子載體 )250nmol
高 pH 緩沖液套裝30 次 Insulin18mg
中 pH 緩沖液套裝30 次 Indo-1,五銨鹽1mg
低 pH 緩沖液套裝30 次 Indo-1 AM1mg
FBP活性計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位,。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位,。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3 L,;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,,1cm,;V樣:加入樣本體積,0.1 mL,;V樣總:加入提取液體積,,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,,5 min,;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,;W:樣本質(zhì)量,,g。