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產(chǎn)品名稱(chēng):超氧陰離子清除能力微量法測(cè)試盒
規(guī)格 : 100管/96樣
測(cè)試方法: 微量法
貨號(hào):GOY-01S6461
分類(lèi):氧化與抗氧化系列
商品介紹:
超氧陰離子自由基作為生物體代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一種自由基,,可攻擊生物大分子,如脂質(zhì),、蛋白質(zhì),、核酸和聚不飽和脂肪酸等,使其交鏈或者斷裂,,引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的破壞,,與機(jī)體衰老和病變有很密切的關(guān)系,清除超氧陰離子自由基的研究已經(jīng)得到了廣泛的關(guān)注,。
測(cè)定原理:
AP-TEMED系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子,,與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2-,NO2-與對(duì)氨基苯磺酸和α-萘胺的作用生成紅色的偶氮化合物,,在530nm處有特征吸收峰,,樣品對(duì)超氧陰離子的清除能力與530nm的吸光值呈負(fù)相關(guān),。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:
天平、低溫離心機(jī),、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板,、恒溫水浴鍋,。
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,4℃保存,。
提取液二:液體50mL×1瓶,,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,,-20℃保存,;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存,;
試劑二:液體18μL×1瓶,,4℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,,用不完的試劑4℃保存,;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存,;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,,用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體50mL×1瓶,, 4℃保存,;
測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,,蒸餾水調(diào)零。
2,、 將試劑一,、二、三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘,。
3,、 加樣表:
![圖2.jpg 圖2.jpg](https://img73.chem17.com/6fd5d5abffebbb9ee0327440cf20a8da16673b608148826cf3e0d36e1a4bd8f052dcff23e0c013fb.jpg)
樣本的前處理
①總FBP酶提取:建議稱(chēng)取約0.1g樣本,,加入1mL提取液一,,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,,200W,,破碎3s,,間歇7s,總時(shí)間1min),,然后4℃,8000g離心10min,,取上清測(cè)定,。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),,冰浴勻漿后于4℃,,200g離心5min,棄沉淀,,取上清在4℃,,8000g離心10min,取上清用于測(cè)定胞漿FBP酶活性,,取沉淀加1mL提取液二,,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,,破碎3s,,間歇7s,總時(shí)間1min),,然后4℃,,8000g離心10min,取上清測(cè)定葉綠體中FBP酶活性,。
建議測(cè)定總FBP酶活性,,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的FBP,,則按照步驟②提取粗酶液,。
0酸化鉀ATP酶蛋白a1抗體 自噬相關(guān)蛋白4A抗體
0酸化內(nèi)收蛋白a1抗體 自噬相關(guān)蛋白3抗體
0酸化腺苷單0酸活化蛋白激酶α1抗體 自噬相關(guān)蛋白1抗體
酸性神經(jīng)酰胺酶1抗體 自噬相關(guān)蛋白18抗體
0酸化腎上腺素能受體β2抗體(β2-AR ) 自噬相關(guān)蛋白16A抗體
大鼠白三烯C4(LTC4)elisa分析檢測(cè)試劑盒
大鼠白三烯C4(LTC4)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠白三烯D4(LTD4)elisa分析檢測(cè)試劑盒
大鼠白三烯D4(LTD4)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠白三烯E4(LTE4)elisa分析檢測(cè)試劑盒
超氧陰離子清除能力微量法測(cè)試盒酸酚100mL 中草藥 DNAout20 次
超純水100mL 中草藥 DNAout100 次
DEPC 水100mL 中 pH 緩沖液套裝30 次
RNase-free 水1mL 質(zhì)譜兼容型蛋白銀染試劑盒10 次
RNase-free 水10mL 質(zhì)粒 ( 載體 ) 系列產(chǎn)品2μg
FBP活性計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位,。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應(yīng)體系總體積,,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),,6.22×103 L / mol /cm,;d:比色皿光徑,1cm,;V樣:加入樣本體積,,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,,1mL,;T:反應(yīng)時(shí)間,5 min,;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,,mg/mL,;W:樣本質(zhì)量,g,。