商品介紹：
蔗糖轉(zhuǎn)化酶（Invertase,，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,，是高等植物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一,。根據(jù)最適 pH，將高等植物Ivr分為酸性轉(zhuǎn)化酶（AI）和中性轉(zhuǎn)化酶（NI）兩種類型,。                         

NI主要存在于細(xì)胞質(zhì)中,，負(fù)責(zé)分解細(xì)胞質(zhì)中蔗糖為果糖和葡萄糖。

測定原理：

NI催化蔗糖分解產(chǎn)生還原糖,，進(jìn)一步與3,5－二硝基水楊酸反應(yīng),，生成棕紅色氨基化合物，在510nm有特征光吸收,，在一定范圍內(nèi)510nm光吸收值與還原糖生成量成正比,。通過光吸收增加速率來計算NI活性

自備用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī),、水浴鍋,、可調(diào)式移液器,、微量石英比色皿/96孔板、研缽,、冰和蒸餾水,。

產(chǎn)品名稱：中性轉(zhuǎn)化酶（NI）微量法測試盒
規(guī)格 : 100管/48樣
測試方法: 微量法
貨號：GOY-01S6704
分類：蔗糖系列

試劑的組成和配制
提取液一：液體50mL×1瓶，4℃保存,。
提取液二：液體50mL×1瓶,，4℃保存。
試劑一：粉劑×1瓶,，-20℃保存,；臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存,；
試劑二：液體18μL×1瓶,，4℃保存；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,，用不完的試劑4℃保存,；
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存,；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,，用不完的試劑4℃保存；
試劑四：液體50mL×1瓶,， 4℃保存,；
測定步驟
1、 分光光度計預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長至340nm,，蒸餾水調(diào)零。
2,、 將試劑一,、二、三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘,。
3,、 加樣表：

樣本的前處理
①總FBP酶提取：建議稱取約0.1g樣本,，加入1mL提取液一,，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W,，破碎3s,，間歇7s，總時間1min）,，然后4℃,，8000g離心10min,，取上清測定,。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本,，加入1mL提取液一），冰浴勻漿后于4℃,，200g離心5min,，棄沉淀，取上清在4℃,，8000g離心10min,，取上清用于測定胞漿FBP酶活性，取沉淀加1mL提取液二,，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴,，200W，破碎3s,，間歇7s,，總時間1min），然后4℃,，8000g離心10min,，取上清測定葉綠體中FBP酶活性。
建議測定總FBP酶活性,，按照步驟①提取粗酶液,，若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP，則按照步驟②提取粗酶液,。
FBP活性計算：
（1）按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位,。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積,，1×10-3 L,；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm,；d：比色皿光徑,，1cm；V樣：加入樣本體積,，0.1 mL,；V樣總：加入提取液體積，1mL,；T：反應(yīng)時間,，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL,；W：樣本質(zhì)量,，g。
【友情提示】：本產(chǎn)品僅供科研研究使用,，不得用于人體臨床直接檢測,。避免給您帶來不必要的損失，請仔細(xì)閱讀購買說明,！
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