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當前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>核酸擴增>> 10次cDNA第二鏈合成試劑盒

cDNA第二鏈合成試劑盒

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產(chǎn)品型號10次

品       牌R&D/美國

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-04-22 14:14:19瀏覽次數(shù):280次

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供貨周期 現(xiàn)貨 貨號 GOY-F10276
應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 僅供科研使用
cDNA第二鏈合成試劑盒公司正*的各種產(chǎn)品細胞肌酸激酶(CK)總活性酶連續(xù)循環(huán)比色法
組織肌酸激酶(CK)總活性酶連續(xù)循環(huán)比色法
體液肌酸激酶(CK)總活性酶連續(xù)循環(huán)比色法
細胞肌酸激酶同工酶肌肉型(CK-MM)活性比色法定量檢測試劑盒
組織肌酸激酶同工酶肌肉型(CK-MM)活性比色法定量檢測試劑盒

DNA提取流程圖:

QQ截圖20220414142532.png

下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研

中文名稱

英文名稱

產(chǎn)品規(guī)格

貨號

cDNA第二鏈合成試劑盒

Second Strand cDNA Synthesis Kit

10

GOY-F10276

產(chǎn)品詳細介紹:

本試劑盒是一種在合成了cDNA第一鏈的基礎(chǔ)上去除RNA-DNA雜合鏈中的RNA鏈并合成cDNA第二鏈,,終形成雙鏈cDNA的試劑盒。本試劑盒包含了進行cDNA第二鏈合成所需的各種試劑,。

本試劑盒采用RNase H使RNA-DNA雜合鏈中的RNA產(chǎn)生切口,,此時DNA Polymerase   I可以通過切口平移(nick   translation)反應(yīng)催化形成cDNA第二鏈,。

使用本試劑盒合成的雙鏈cDNA,,可以直接用于后續(xù)的常規(guī)PCRreal-time PCR,、cDNA文庫的構(gòu)建等,。

本試劑盒用于體積為20微升的cDNA第一鏈合成反應(yīng)的后續(xù)反應(yīng)時,足夠進行20cDNA第二鏈樣品的合成,。

產(chǎn)品組份:

RNase   H(1U/μl)————————10μl

DNA Polymerase   I(10U/μl)———30μl

Reaction   Buffer(10X)——————100μl

儲存條件:-20℃,。

 

操作步驟:
1.
勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅,。
b.
單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞,,每10cm2面積(3.5cm直徑的培養(yǎng)板)1ml,用移液器吸打幾次,。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,,不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNADNA污染,。
c
.細胞懸液 離心收集細胞,,每5-10×106動物、植物,、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解,。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理,。
2
.將勻漿樣品在室溫(15-30)放置5分鐘,,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3
.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),,脂肪,,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-810000×g離心10分鐘,,取上清,。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,多糖,,高分子量DNA,,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,,上層有大量油脂應(yīng)去除,。取澄清的勻漿液進行下一步操作,。
5.
每使用1ml TRIzol加入0.2ml,,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘,。
6. 2-8
10000×g離心15分鐘,。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層,。RNA主要在水相中,,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅
7.
把水相轉(zhuǎn)移到新管中,,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相,,進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA,。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,,室溫放置10分鐘。
8. 2-8
10000×g離心10分鐘,,離心前看不出RNA沉淀,,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清,。
人可溶性白細胞抗原G(sHLA-G)ELISAKit                 Capecitabine  中文名:卡培他濱  分子式:C15H22FN3O6 

人可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISAKit     Tigecycline  中文名:  分子式:C29H39N5O8 

人抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISAKit     Tigogenin  77-60-1  中文名:劍麻皂素  分子式:C27H44O3  度:98.0%  關(guān)鍵詞:  毛地黃屬; 萬年蘭屬; 螺甾烷; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

人抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISAKit                 Tigogenin  77-60-1  中文名:劍麻皂素  分子式:C27H44O3 

人抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISAKit     Tigogenin  中文名:劍麻皂素  分子式:C27H44O3
甲鈷胺  Mecobalamin  質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR Plagrowthhormone,GHELISA試劑盒植物生長激素(GH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

右旋酮洛芬氨丁三  (S)-Ketoprofen trometamol  質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR 小鼠基質(zhì)細胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA試劑盒 ,,英文名: SDF-1a/CXCL12 ELISA Kit

右旋酮洛芬氨丁三(標準品)  (S)-Ketoprofen trometamol  質(zhì)量規(guī)格:含量測定 大鼠酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA檢測試劑盒RatPyruvateKinase,M2-PKELISAKit 96T/48T

植物凝膠(Sigma)  Phytagel  質(zhì)量規(guī)格:進分;SigmaP8169 人成纖維細胞生長因子23(FGF-23)試劑盒 Human fibroblast growth factor-23,FGF-23 ELISA Kit

右旋酮洛芬  (S)-(+)-Ketoprofen  質(zhì)量規(guī)格:>98.5% RatsubstancePreceptor,SP-RELISAKit大鼠P物質(zhì)受體(SP-R)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

5-磺基水楊酸  sulfosalicyclic acid  質(zhì)量規(guī)格:AR JM109鈣轉(zhuǎn)感受態(tài)細菌5X200微升

1-氨基-2-萘酚-4-磺酸  1-Amino-2-naphthol-4-sulfonic Acid   質(zhì)量規(guī)格:AR Plahormoneabscisicacid,ABAELISA試劑盒植物激素脫落酸(ABA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T

利卡西平;10,11-二氫-10-羥基卡馬西平  10,11-Dihydro-10-hydroxy Carbamazepine   質(zhì)量規(guī)格:>98%,美國進口原裝 小鼠基質(zhì)細胞衍生因子1(SDF1)ELISA試劑盒 ,,英文名: SDF1 ELISA Kit

三七皂苷R2(S)(標準品)  S-Notoginsenoside R2  質(zhì)量規(guī)格:HPLC90%,,標準品 人葡萄糖60酸異構(gòu)酶(GPI)ELISA檢測試劑盒Humanglucose-6-phosphateisomerase,GPIELISAKit 96T/48T

無水醋酸鋅  Zinc acetate  質(zhì)量規(guī)格:AR 大鼠纖維蛋白原β鏈(Fgb/Ab1-181/Ab1-216/Ac1-581)試劑盒 Rat fibrinogen beta chain ELISA Kit
cDNA
第二鏈合成試劑盒細菌β-(β-AMYLASE)活性PNPG5酶偶聯(lián)比色法定量檢測試劑

真菌/酵母β-(β-AMYLASE)活性PNPG5酶偶聯(lián)比色法定量檢測試劑

植物β-(β-AMYLASE)活性PNPG5酶偶聯(lián)比色法定量檢測試劑

細菌a-a-AMYLASE)活性比色法定量檢測試劑盒

真菌/酵母a-a-AMYLASE)活性比色法定量檢測試劑盒

實驗步驟
(1)
實驗開始前將RNA提取液于65水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL80ul,50mL中加入300ul)
(2)
取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65
水浴3-10 min,期間混勻2-3
(4)
加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4,5 min)
(5)
取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4,5 min)
(6)
加入1/4V體積10M LiCl溶液,4放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4
離心20min
(8)
棄上清,500ul SSTE溶解沉淀
(9)
::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1(10,000rpm,4,5min)
(10)
2V體積的無水乙,-70冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4
離心20 min
(12)
棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)
200ulDEPC處理水溶解
(14)
用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(
在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))


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