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當(dāng)前位置:上海谷研實(shí)業(yè)有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>核酸擴(kuò)增>> 10次DNA Shuffling試劑盒
參 考 價(jià) | 面議 |
產(chǎn)品型號(hào)10次
品 牌R&D/美國(guó)
廠商性質(zhì)經(jīng)銷(xiāo)商
所 在 地上海市
更新時(shí)間:2022-04-22 13:55:17瀏覽次數(shù):318次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號(hào) | GOY-F10259 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 | 主要用途 | 僅供科研使用 |
下列是產(chǎn)品的訂購(gòu)信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號(hào) |
DNA Shuffling Kit | 10次 | GOY-F10259 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
DNA Shuffling即DNA分子的體外同源重組,它是一種分子水平上的定向進(jìn)化(directed evolution)技術(shù),,它以一個(gè)或多個(gè)基因?yàn)槠鹗疾牧?,通過(guò)先隨機(jī)斷裂成小片段,,再進(jìn)行互為模板和引物的PCR(無(wú)外加引物),,后再進(jìn)行常規(guī)PCR(外加引物)等處理,,后得到含有大量DNA重組突變的PCR產(chǎn)物,。 產(chǎn)品特點(diǎn): 1.即開(kāi)即用,,用戶只需要提供樣品DNA模板,無(wú)需單獨(dú)準(zhǔn)備各成分,。 2.操作手冊(cè)經(jīng)過(guò)優(yōu)化,,1-2天即可完成,節(jié)省大量?jī)?yōu)化時(shí)間,。 3.本產(chǎn)品只適用于科研,,不能用于臨床診斷。 儲(chǔ)存條件:低溫運(yùn)輸,,-20℃保存,,保存期限一年。 |
DNA提取流程圖:
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可,!固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無(wú)水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量
(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理,。樣品體積不應(yīng)超過(guò)TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞,,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,,不取決于細(xì)胞數(shù),。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c.細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞,,每5-10×106動(dòng)物,、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol,,反復(fù)吸打,。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理,。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),,脂肪,,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清,。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜,,多糖,高分子量DNA,,上清中含有RNA,。處理脂肪組織時(shí),上層有大量油脂應(yīng)去除,。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作,。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,,室溫放置3分鐘,。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機(jī)相,,上層為無(wú)色水相和一個(gè)中間層,。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅,。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相,進(jìn)一步操作見(jiàn)后,。用異丙沉淀水相中的RNA,。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘,。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀,。移去上清,。
人整合素連接激酶1elisa試劑盒 人整合素連接激酶1試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 人整合素連接激酶1試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,,來(lái)源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),,產(chǎn)品別名:人整合素連接激酶1試劑盒、人整合素連接激酶1 elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月,。 2-Aminothiazol-4-acetic acid 中文名:2-氨基噻唑-4-乙酸 分子式:C5H6N2O2S
人整合素連接激酶1(ILK-1)ELISA試劑盒 2-Aminophenyl phenyl sulfone 4273-98-7 中文名:2-氨基二苯砜 分子式:C12H11NO2S 度:98.0%
人整合素連接激酶1(ILK-1)ELISAKit 2-Aminophenyl phenyl sulfide 1134-94-7 中文名:2-氨基二苯硫醚 分子式:C12H11NS 度:98.0%
人整合素αⅤβ3(IegrinαⅤβ3)ELISA試劑盒 2-Aminophenyl phenyl sulfone 4273-98-7 中文名:2-氨基二苯砜 分子式:C12H11NO2S
人真胰島素(TI)ELISA試劑盒 2-Aminophenyl phenyl sulfide 中文名:2-氨基二苯硫醚 分子式:C12H11NS 度:98.0%
DL-苦杏仁酸 DL-Mandelic acid 質(zhì)量規(guī)格:AR Humanai-gangliosideaibody,GM1ELISA試劑盒人抗神經(jīng)節(jié)苷脂抗體(GM1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
抗壞血酸,;C Ascorbic acid;vitamin C 質(zhì)量規(guī)格:AR;>99% 植物可溶性酸性蔗糖轉(zhuǎn)化酶(acidinvease)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒(液泡)20
C(標(biāo)準(zhǔn)品) Ascorbic acid,;vitamin C 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定 HumanVitaminDReceptor,VDRELISAKit人D受體(VDR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
十八胺; 十八烷基胺; 硬脂胺 Octadecanamine 質(zhì)量規(guī)格:AR 小鼠甲狀旁腺激素(PTH)ELISA試劑盒 ,英文名: PTH ELISA Kit
山梨酸 Sorbic acid 質(zhì)量規(guī)格:AR,99% 大鼠αL巖藻糖苷酶(AFU)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratalpha-L-fucosidase,AFUELISAKit 96T/48T
盧立康唑 Luliconazole 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 人穿孔素/成孔蛋白(PRF1/PFP)試劑盒 Human PRF1/PFP ELISA Kit
5-硝基-1,10-菲咯啉;5-硝基鄰菲啰啉 5-Nitro-1,10-phenanthroline 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR RatsolubleToll-likereceptor6,sTLR-6ELISAKit大鼠可溶性Toll樣受體6(sTLR6)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
鐵冬青酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Rotundic acid 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 INSULIN蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒25
酚藍(lán)鈉 Bromophenol blue salt 質(zhì)量規(guī)格:AR Peanagglinin,PNAELISA試劑盒花生凝集素(PNA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
百里香酚蘭鈉 Thymol blue salt 質(zhì)量規(guī)格:AR 小鼠甲狀旁腺激素(PTH)ELISA 試劑盒
DNA Shuffling試劑盒細(xì)胞磷酸腺苷脫氨酶(AMPD)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
血液蘋(píng)果酸脫氫酶(MDH)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
組織蘋(píng)果酸脫氫酶(MDH)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞蘋(píng)果酸脫氫酶(MDH)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
通用型蘋(píng)果酸脫氫酶(MDH)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
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