詳細介紹
DNA提取流程圖:
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
5-(and-6)-Carboxy-2’,7’-dichlorofluorescein diacetate, succinimidyl ester | 10mg | GOY-F10183 |
產(chǎn)品詳細介紹:
活細胞熒光示蹤探針CDCFDA, SE已被廣泛證實,,用CDCFDA 活細胞綠色熒光探針標記細胞能有效確定總細胞的數(shù)量和一個樣本中存在多少活細胞。流式細胞術(shù)結(jié)合熒光染色法是分析非均質(zhì)細胞種群的有力工具,。 FDA 和它的衍生物無熒光分子進入細胞后被胞內(nèi)無特異性的酯酶所水解產(chǎn)生熒光,。這些熒光產(chǎn)物只能積聚在具有完整細胞膜的細胞中。因此,,死細胞無完整細胞膜不能被染色,。FDA 具備精確地膜轉(zhuǎn)運動力學(xué)和胞內(nèi)水解作用或者類似物(CDCFDA)相關(guān)的細胞功能,因此可以通過熒光顯微鏡或者流式細胞儀來檢測FDA 標記的細胞,。過FDA 熒光標記的細胞在細胞系或者菌株中存在變化,,可能是由于不同胞內(nèi)酯酶的活性所造成的?;罴毎麩晒馐聚櫶结?/span>CDCFDA, 琥珀酰亞胺酯是一個胺化FDA 衍生物,,可以用來制備各種FDA偶聯(lián)物,。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理,。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅,。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,,用移液器吸打幾次,。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細胞數(shù),。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染,。
c.細胞懸液 離心收集細胞,每5-10×106動物,、植物,、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打,。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解,。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,,使核酸蛋白復(fù)合物*分離,。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,取上清,。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,,多糖,高分子量DNA,,上清中含有RNA,。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應(yīng)去除,。取澄清的勻漿液進行下一步操作,。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,,室溫放置3分鐘,。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機相,,上層為無色水相和一個中間層,。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅,。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相,,進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA,。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,,離心前看不出RNA沉淀,,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清,。
兔白細胞介素35elisa試劑盒 兔白細胞介素35試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 兔白細胞介素35試劑盒,,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進口分裝),,產(chǎn)品別名:兔白細胞介素35試劑盒,、兔白細胞介素35 elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月。 4-Biphenylcarboxylic acid 中文名:4-苯甲酸 分子式:C13H10O2 度:98.0%
兔白細胞介素-35(IL-35)ELISA試劑盒 4β-Hydroxywithanolide E 中文名:4β-羥基醉茄內(nèi)酯E 分子式:C28H38O8 度:98.0%
兔白細胞介素-35(IL-35)ELISA試劑盒 4β-Hydroxywithanolide E 中文名:4β-羥基醉茄內(nèi)酯E 分子式:C28H38O8
兔白細胞介素1elisa試劑盒 兔白細胞介素1試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 兔白細胞介素1試劑盒,,規(guī)格型號:96T/48T,,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:兔白細胞介素1試劑盒,、兔白細胞介素1elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月,。 4-Biphenylcarboxylic acid 中文名:4-苯甲酸 分子式:C13H10O2
兔白細胞介素15elisa試劑盒 兔白細胞介素15試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 兔白細胞介素15試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,,來源:elisa試劑盒(進口分裝),,產(chǎn)品別名:兔白細胞介素15試劑盒、兔白細胞介素15elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個月,。 4-Biphenylcarboxylic acid 92-92-2 中文名:4-苯甲酸 分子式:C13H10O2 度:98.0%
D-核糖(標準品) D-(-)-Ribose 質(zhì)量規(guī)格:>99%,標準品 大鼠乙酰(Ach)ELISA檢測試劑盒Ratacetylcholine,ACHELISAKit 96T/48T
D-核糖 D-(-)-Ribose 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 人蛋白C(PC)試劑盒 Human Protein C ELISA Kit
二硫蘇糖(DTT) DL-Dithiothreitol 質(zhì)量規(guī)格:>99%,分子生物學(xué)級 RatPhosphotylinosital3kinase,PI3KELISAKit大鼠0酸肌3激酶(PI3K)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
D(+)-松二糖 D(+)-Turanose 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR GSK-3ALPHA蛋白共沉淀分析試劑盒5
D-果糖-1,6-二三鈉鹽 D-Fructose 1,6-bisphosphate salt 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR Mousethioredoxieductase,xRELISA試劑盒小鼠硫氧還蛋白還原酶(xR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
海帶多糖,;昆布糖 (來自褐藻類) Laminarin from Laminaria digitata 質(zhì)量規(guī)格:BR,日本進口分裝 小鼠抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA試劑盒 ,,英文名: PA-IgG/M/A ELISA Kit
(1:250),,粉 Pancreatin 質(zhì)量規(guī)格:酶活1:250,BR 大鼠血栓素B2(TXB2)ELISA檢測試劑盒RatThromboxaneB2,TXB2ELISAKit 96T/48T
木瓜蛋白酶(800u/mg) Papain 質(zhì)量規(guī)格:800u/mg 人蛋白ATP1B4(ATP1B4)試劑盒 Human ATP1B4 ELISA Kit
木瓜蛋白酶(2000u/mg) Papain 質(zhì)量規(guī)格:2000u/mg;200萬u/g Ratpigmeepithelium-derivedfactor,PEDFELISAKit大鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
(1:2500) Pancreatin 質(zhì)量規(guī)格:酶活1:2500,BR GSK-3BETA蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25
細胞質(zhì)標記染料,長效示蹤CDCFDA,SE細胞Akt/PKB激酶總活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
組織Akt3/PKBγ激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
細胞Akt3/PKBγ激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
組織Akt2/PKBβ激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
細胞Akt2/PKBβ激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))