詳細(xì)介紹
培養(yǎng)操作:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜(或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,,加入約 8ml 培養(yǎng)基,,培養(yǎng)過夜),。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,,細(xì)胞變圓 脫 落后,,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清,。加 1ml 血清重懸細(xì)胞,,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,,DMSO 終濃度為 10%,,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,,注意凍 存管做好標(biāo)識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,,2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | GOY-01X0203 |
名稱 Sf21 (昆蟲卵巢細(xì)胞)
別稱 SF21; Sf-21; SF-21; IPLB-SF-21-AE; IPLB-Sf21-AE; IPLB-SF21-AE; IPLB-SF 21AE; IPLB-Sf21AE; IPLB-SF21AE; IPLB-SF-21; IPLB-Sf-21; IPLB-SF 21; IPLB-Sf21; IPLB-SF21
年齡(性別) 蛹
組織來源 卵巢
生長特性 半貼半懸
細(xì)胞形態(tài) 圓形
背景描述 Sf21細(xì)胞是源于雌性草地貪夜蛾蛹的卵巢組織,是Sf9細(xì)胞的克隆系,;Sf21細(xì)胞可以用于昆蟲病毒的基礎(chǔ)研究和復(fù)制桿狀病毒表達(dá)載體,。
生物安全等級 1
生長培養(yǎng)基 TNM-FH+10% FBS+1% P/S
推薦傳代比例 1:2-1:4
推薦換液頻率 2~3次/周
倍增時(shí)間 ~26-72 hours
凍存條件
凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度:液氮
培養(yǎng)條件
氣相:空氣,100%,;
溫度:28℃
保藏機(jī)構(gòu) DSMZ; ACC-119 ECACC; 05022801
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化,;
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,,棄去上清,,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二,、免疫熒光鑒定:
1,、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min,;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜,;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h,;
6,、用PBS沖洗3次,每次10min,,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
多粘芽孢桿菌 變形桿菌
蠟狀芽孢桿菌蕈狀變種 斯氏梭菌
牙齦卟啉單胞菌 黃色長孢鏈霉菌
缺陷假單胞菌ATCC19146凍干粉 奇異變形桿菌凍干粉
扁柄側(cè)耳 單增李斯特菌
大鼠白介素1受體Ⅱ(IL1R2)elisa檢測試劑盒
大鼠白介素1受體Ⅰ(IL1R1)elisa檢測試劑盒
大鼠白介素1δ(FIL1δ)elisa檢測試劑盒
大鼠白介素1β(IL1β)elisa檢測試劑盒
大鼠白介素1α(IL1α)elisa檢測試劑盒
Sf21 (昆蟲卵巢細(xì)胞)大鼠轉(zhuǎn)錄因子20(TCF20)elisa檢測試劑盒
大鼠轉(zhuǎn)錄因子P65(RELA)elisa檢測試劑盒
大鼠轉(zhuǎn)醛縮酶(TALDO1)elisa檢測試劑盒
大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白 TRF elisa檢測試劑盒
大鼠轉(zhuǎn)鐵蛋白(TF)elisa檢測試劑盒
冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時(shí),, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,,惟存活率稍微降低一些。