冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下,， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存,。*-20 ℃不可超過1 小時,， 以防止冰晶過大,，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些,。

產(chǎn)品屬性：

名稱    大鼠髖臼軟骨細胞
2.組織來源：軟骨組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

大鼠髖臼軟骨細胞分離自髖關節(jié)軟骨組織,，髖關節(jié)是人體大、穩(wěn)定的關節(jié)之一,，是典型的球臼關節(jié)。髖關節(jié)既具有良好的內在穩(wěn)定性,，也具有靈活的活動性,。髖臼位于髖骨外側面中央，呈半球形深凹,，直徑約30~50mm,，表面覆蓋厚約2mm的透明關節(jié)軟骨，呈半月形分布,。中央是髖臼窩,，無軟骨覆蓋，由哈佛腺充填,，可以隨關節(jié)內壓力的增減擠出或者吸入關節(jié)液,，以維持關節(jié)內壓力的平衡。髖臼邊緣的環(huán)形關節(jié)盂唇可以加深,、加寬髖臼,，使髖臼容納股骨頭的大部并處于穩(wěn)定的位置，加強了髖關節(jié)的穩(wěn)定性,。幼稚的關節(jié)軟骨細胞位于關節(jié)軟骨組織的表層,，單個分布、體積較小,、呈橢圓形,，長軸與關節(jié)軟骨表面平行，越向深層的關節(jié)軟骨細胞體積之間增大呈圓形,，細胞核圓形或卵圓形,、染色淺，細胞質弱嗜堿性,，常見數(shù)量不一的脂滴,。成熟的關節(jié)軟骨細胞多2-8個成群分布于關節(jié)軟骨陷窩內，這些關節(jié)軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成,，稱為同源細胞群,。電鏡下，關節(jié)軟骨細胞有突起和皺褶,，細胞質內有大量的粗面內質網(wǎng)和發(fā)達的高爾基復合體及少量的線粒體,。在組織切片中，關節(jié)軟骨細胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細胞之間出現(xiàn)較大的腔隙,。體外培養(yǎng)的關節(jié)軟骨細胞對于研究其生理功能,、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠髖臼軟骨細胞采用膠原酶聯(lián)合中性消化制備而來,，細胞總量約為5×105cells/瓶,。

6.質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠髖臼軟骨細胞經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次,；

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

培養(yǎng)操作：
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液,，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類,；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%,，細胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識,。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
微量 RNA 定量試劑盒1mL  鮭魚精 DNA 溶液1mL

第五章 核酸擴增產(chǎn)品  硅膠膜離心吸附柱再生液500 次

PCR 優(yōu)化試劑盒1套  硅膠膜離心吸附柱系列 ( 小提 )50 套

MgCl2溶液，25mM,，PCR 級5mL  硅膠膜離心吸附柱 ( 小提 ) 收集管50 只

明膠溶液,，2%，PCR 級1.5mL  硅膠膜離心吸附柱 ( 大提 ) 收集管1只
人β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)elisa檢測試劑盒

人β半乳糖苷酶(βGAL)elisa檢測試劑盒免費代測

人β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)elisa檢測試劑盒

人β4整合素(ITG β4/CD104)elisa檢測試劑盒

人β2轉鐵蛋白(β2TF)elisa檢測試劑盒
大鼠髖臼軟骨細胞小鼠多配體蛋白聚糖1(SDC1)elisa檢測試劑盒

小鼠多肽YY(PYY)elisa分析檢測試劑盒

小鼠多肽YY(PYY)elisa檢測試劑盒

小鼠多萜長醇二磷酸寡糖蛋白環(huán)糊精糖基轉移酶(DDOST/OST-48)elisa分析檢測試劑盒

小鼠多萜長醇二磷酸寡糖蛋白環(huán)糊精糖基轉移酶(DDOST/OST-48)elisa檢測試劑盒
實驗報告：
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1,、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次,，后將成1mm3左右大?。?/span>
2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s，置37℃條件下消化10min,，之后用滴管吹打制成單細胞懸液,，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s,，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次,，直至組織*被消化,；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,，1200r/min 離心10min,，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5,、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基,，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),；
二、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次,，每次10min,，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2,、PBS沖洗細胞2次,，每次10min，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min,；
3,、PBS沖洗細胞2次，每次10min,，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細胞30min；
4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5,、PBS沖洗細胞3次,，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗,， 37℃條件下放置1h,；
6、用PBS沖洗3次,，每次10min,，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。