詳細(xì)介紹
探針標(biāo)記 PCR Mix 0.5mL實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品及特點(diǎn):
易錯(cuò) PCR(error-prone PCR)是利用 Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性,在一定條件下(如不同的 dNTP 濃度,、Mg 濃度和 MnCl2存在)能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變,。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法,則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體,。易錯(cuò) PCR 和常規(guī) PCR 的比較如下:本產(chǎn)品就是專門為廣大的研究工作者進(jìn)行易錯(cuò) PCR 而開(kāi)發(fā),本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,,十分簡(jiǎn)單方便,,尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的*性。
2. 配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,,突變率穩(wěn)定,,突變沒(méi)有趨向性。易錯(cuò) PCR 的突變率為 0.66% (±0.13%),,詳見(jiàn)使用手冊(cè)疑難解答,。
3. 比體內(nèi)基因突變更快捷簡(jiǎn)單,但如果在 PCR 引物中設(shè)計(jì)位點(diǎn),,則可使產(chǎn)物克隆到表達(dá)載體,,也可以用于體內(nèi)蛋白活性的篩選。
4. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCR(sequential error-prone PCR),,只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò) PCR 的模板即可,,使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。
5. 只適用于擴(kuò)增 1kb 以下的產(chǎn)物,,對(duì)于 1kb 以上的產(chǎn)物,,建議分段擴(kuò)增。
探針標(biāo)記 PCR Mix 0.5mL實(shí)驗(yàn)步驟產(chǎn)品介紹:
規(guī)格及成分:
使用方法:
1. 以 30 uL 的標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系為例,,如果反應(yīng)體系不是 30 uL,,各成分需要等按比例增加或減少。在一干凈的 PCR 管中,,加入下列成分:易錯(cuò) PCR Mix, 10× 3 uL 易錯(cuò) PCR dNTP, 10× 3 uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自備 DNA 模板(10ng/uL) 1 uL PCR 引物(自備,,10 uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶(5U/uL) 1 -5 U 補(bǔ)水到 30 uL
2. 按已經(jīng)優(yōu)化的 PCR 條件進(jìn)行一定循環(huán)數(shù)的 PCR(循環(huán)數(shù)與突變率的關(guān)系見(jiàn)下表),然后取 5 uL 電泳檢查,。如果沒(méi)有優(yōu)化的 PCR 條件,,一般可以先嘗試下面的 PCR 條件: PCR 前變性 94℃ 3 分鐘易錯(cuò) PCR 94℃ 1 分鐘 45℃ 1 分鐘 循環(huán) 30 次(見(jiàn)注) 72℃ 1 分鐘注:易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng),也不需要在 PCR 結(jié)束后做延伸處理,。
3. 電泳檢測(cè)是否得到預(yù)計(jì)長(zhǎng)度的 PCR 產(chǎn)物,。
pQE-17(pQE17)
pRET.IL (No IRES-EGFP)(pRETIL)
pRNATin-H1.2/Retro(pRNATinH1.2Retro)(60908-6003)
pSAchideltaB
pShuttle(60908-6130)y
pSMART FOS v2.0 (linearized)
pSV2RbetaG
pTagYFP-C(pTagYFPC)
pTracer-CMV2 (pTracerCMV2 )(60908-6560)
pTurboGFP-C(pTurboGFPC)
pUK4134
pVT65
pYADE4(60908-7010)
RNAi-Ready pSIREN-RetroQ-DsRed-Express(RNAiReadypSIRENRetroQDsRedExpress)
V180 pLP Triple-Flag SD - Accept百
燕麥狀曲霉 Aspergillus avenaceus
大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
KG-1(人急性骨髓性白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
泡盛曲霉變種 Aspergillus awamori var.
土生隱球酵母 Cryptococcus humicola
HBZY-1(大鼠腎小球系膜細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
rRTEC, 大鼠腎小管上皮細(xì)胞 Rattus
異常漢遜酵母異常變種 Hansenula anomala var. anomala
豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna
NCI-H157(人非小細(xì)胞肺腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
米根霉 Rhizopus oryzae
臭曲霉 Aspergillus foetidus
大鼠嗅鞘細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna
MA-891(小鼠腺高轉(zhuǎn)移細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
植物桿菌 Lactobacillus Plantarum
沼澤紅假單胞菌 Rhodosedoseudomouas padustris
大鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mLor(V180pLPTripleFlagSDAcceptor)
YEp357R
YRp14/ARS1/CEN4(YRp14ARS1CEN4)
陶瓷研缽(直徑60 mm)
月示蛋白胨
Alkalispirillum mobilis medium