大鼠正常食管上皮細(xì)胞,；RNEEC/HL-012圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研,，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 大鼠正常食管上皮細(xì)胞,；RNEEC/HL-012圖片
形態(tài)特性  上皮樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞屬專利保藏,，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1,、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3,、凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲(chǔ)存,。
二、細(xì)胞處理：
1,、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2,、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘,，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走）,，加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中,，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存,。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等，購(gòu)買到貨后,，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè),，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi),，活力>95%,，無細(xì)菌,、真菌、支原體污染,。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中,，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次,。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,，加入適量胰酶,，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育,，每隔2~3min顯微鏡下觀察,，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,，加入新鮮培養(yǎng)基,，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用,，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況,。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),，1000rpm離心5min，棄去上清,，加入新鮮的培養(yǎng)基,，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液,，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。

人酶原Ⅱ試劑盒規(guī)格型號(hào)：96T/48T人酶原Ⅱ試劑盒,，規(guī)格型號(hào)：96T/48T,，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人酶原Ⅱ試劑盒,、人酶原Ⅱ elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個(gè)月,。
人血清白試劑盒規(guī)格型號(hào)：96T/48T人血清白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T,，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝）,，產(chǎn)品別名：人血清白試劑盒、人血清白elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個(gè)月,。
人血管緊張Ⅱ受體2抗體試劑盒規(guī)格型號(hào)：96T/48T人血管緊張Ⅱ受體2抗體試劑盒,，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝）,，產(chǎn)品別名：人血管緊張Ⅱ受體2抗體試劑盒,、人血管緊張Ⅱ受體2抗體elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個(gè)月。
人腺苷三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1試劑盒規(guī)格型號(hào)：96T/48T人腺苷三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1試劑盒,，規(guī)格型號(hào)：96T/48T,，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人腺苷三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1試劑盒,、人腺苷三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1 elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個(gè)月,。
人凝聚試劑盒規(guī)格型號(hào)：96T/48T人凝聚試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T,，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝）,，產(chǎn)品別名：人凝聚試劑盒、人凝聚試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個(gè)月,。
人繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激試劑盒規(guī)格型號(hào)：96T/48T人繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激試劑盒,，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝）,，產(chǎn)品別名：人繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激試劑盒,、人繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個(gè)月。
人硫類肝試劑盒規(guī)格型號(hào)：96T/48T人硫類肝試劑盒,，規(guī)格型號(hào)：96T/48T,，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人硫類肝試劑盒,、人硫類肝elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個(gè)月,。
人粒細(xì)胞特異性抗核抗體試劑盒規(guī)格型號(hào)：96T/48T人粒細(xì)胞特異性抗核抗體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T,，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝）,，產(chǎn)品別名：人粒細(xì)胞特異性抗核抗體試劑盒、人粒細(xì)胞特異性抗核抗體elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個(gè)月。100 次    雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒    
鏈霉親和素,，AP 標(biāo)記    131022-0.5    0.5mL
即用型易錯(cuò) PCR 試劑盒    101005-100    100 次
300μL    兔抗雞 IgY，辣根過氧化物酶標(biāo)記    
50U    Furin 蛋白酶    
100mg    遺傳    
10 塊    LB 平板培養(yǎng)基 (Tet 抗性 )    
β- 淀粉酶    CAS9000-91-3    100g
克必隆 G 載體    4610-2    2μg
1g    纖維素酶    
100 次     谷胱甘肽還原酶檢測(cè)試劑盒    
25mg    尿苷 -5'- 二磷酸    
100 次    免 DNA 提取 PCR 試劑盒    
硫酸葡聚糖    CAS9011-18-1    10g
Rosetta 菌種    12-248    1mL
250 次    液體樣品 RNAout    
1mL    JM103 菌種    
1mg    鈣離子載體    
250mL    氯萘酚溶液,，3mg/mL    
組蛋白    CAS9064-47-5    25g
青 G 鹽溶液    120698-10    10mL
人可溶性瘤壞死α受體試劑盒規(guī)格型號(hào)：96T/48T人可溶性瘤壞死α受體試劑盒,，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝）,，產(chǎn)品別名：人可溶性瘤壞死α受體試劑盒,、人可溶性瘤壞死α受體elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個(gè)月。