黑化大家鼠肺成纖維細胞；NRm圖片【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研,，不可用于臨床診斷和治療,。

細胞名稱 黑化大家鼠肺成纖維細胞；NRm圖片
形態(tài)特性  成纖維細胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細胞系來源于一雄性黑化型挪威大鼠的肺組織,。1985年由中國科學院昆明細胞庫建立,。 
培養(yǎng)條件  M-199: with Earle's Balanced Salts Solution (EBSS)  15%NBS
傳代方法  1：2傳代；3-4天一次
傳代情況 P2
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1,、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3,、凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。
二,、細胞處理：
1、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)）,。第二天換液并檢查細胞密度。
2,、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起,，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存,。懸浮細胞凍存時,，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘,，少量保存上清液（防止細胞吸走）,，加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中,，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存,。
質(zhì)量保證:    
我們的細胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等，購買到貨后,，由我們實驗室擴增,、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，100%進口來源,，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%,，無細菌,、真菌、支原體污染,。   細胞到達客戶手中,，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細胞在凍存前死亡,，我們公司都可以免費再向客戶提供一次,。
操作步驟：
1）貼壁細胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi),，吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,，加少量PBS潤洗細胞，加入適量胰酶,，使胰酶的量能蓋住細胞,，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察,，待貼壁細胞間間隙變大,、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基,，晃動細胞瓶,，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細胞,，制成細胞懸液,。控制吹打的力度,，避免產(chǎn)生大量的氣泡,，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng),，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細胞傳代：將細胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),，1000rpm離心5min,，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基,，用吸管小心吹散沉淀,，制成細胞懸液，將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng),。

人脫氧膠原吡啶交聯(lián)試劑盒規(guī)格型號：96T/48T人脫氧膠原吡啶交聯(lián)試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝）,，產(chǎn)品別名：人脫氧膠原吡啶交聯(lián)試劑盒,、人脫氧膠原吡啶交聯(lián)elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個月。
人細胞毒相關(guān)A試劑盒規(guī)格型號：96T/48T人細胞毒相關(guān)A試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T,，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人細胞毒相關(guān)A試劑盒,、人細胞毒相關(guān)Aelisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個月,。
化氫測試盒規(guī)格型號：96T/48T化氫測試盒,，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝）,，產(chǎn)品別名：化氫測試盒,、化氫elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個月。
鮭魚補體4試劑盒規(guī)格型號：96T/48T鮭魚補體4試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T,，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：鮭魚補體4試劑盒,、鮭魚補體4elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個月,。
人α2巨球試劑盒規(guī)格型號：96T/48T人α2巨球試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T,，來源：elisa試劑盒（進口分裝）,，產(chǎn)品別名：人α2巨球試劑盒、人α2巨球elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個月,。
人法尼基二磷法尼基轉(zhuǎn)移酶1試劑盒規(guī)格型號：96T/48T人法尼基二磷法尼基轉(zhuǎn)移酶1試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝）,，產(chǎn)品別名：人法尼基二磷法尼基轉(zhuǎn)移酶1試劑盒,、人法尼基二磷法尼基轉(zhuǎn)移酶1elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個月。0.1mL×10    Tuner(DE3) 感受態(tài)細胞    
XhoI    17-0250    2000U
DNA 稀釋液    121206-10    10mL
50 次    糖蛋白蛋白純化試劑盒    
500U    E.coli DNA 聚合酶 Ι    
1.5mL    即用型高保真 PCR 試劑盒    
25 OD    3´-O-Me-m7G(5´)ppp(5´)G 帽結(jié)構(gòu)類似物    
宿主細胞    12    1mL
天凈沙單細胞 RNA 擴增試劑盒    130551-80    80 次
50mL    無內(nèi)毒素水    
50 T    GSH—PX 測試盒    
500mg    硫酸慶大    
50 次    單酶一管式 RT-PCR 試劑盒 (Tth)    
CHAPS    CAS75621-03-3    1g
EHA105 農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞    140383-10    10×100μL
250mg    新生    
250U    核酸內(nèi)切酶 V    
5g    二硫蘇糖醇 (DTT)    
25mL    十二烷基磺酸清除劑    
遺傳    CAS108321-42-2    100mg
人單核細胞趨化2試劑盒規(guī)格型號：96T/48T人單核細胞趨化2試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T,，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人單核細胞趨化2試劑盒,、人單核細胞趨化2elisa試劑盒保存條件：2-8℃保質(zhì)期：6個月,。