雜交瘤細(xì)胞株；A6說(shuō)明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研,，不可用于臨床診斷和治療,。

細(xì)胞名稱 雜交瘤細(xì)胞株；A6說(shuō)明書
形態(tài)特性  淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞屬專利保藏,，其特征特性尚未公開,。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1,、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3,、凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲(chǔ)存,。
二、細(xì)胞處理：
1,、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2,、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細(xì)胞懸起,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘,，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走）,，加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中,，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存,。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等，購(gòu)買到貨后,，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增,、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),，100%進(jìn)口來(lái)源,，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%,，無(wú)細(xì)菌,、真菌、支原體污染,。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中,，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次,。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,，加入適量胰酶,，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育,，每隔2~3min顯微鏡下觀察,，待貼壁細(xì)胞間間隙變大,、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基,，晃動(dòng)細(xì)胞瓶,，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,，制成細(xì)胞懸液,。控制吹打的力度,，避免產(chǎn)生大量的氣泡,，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng),，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),，1000rpm離心5min，棄去上清,，加入新鮮的培養(yǎng)基,，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液,，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng),。

IKB zeta/MAIL protein  KB抑制蛋白激酶Ζ抗體規(guī)格: 0.2ml
S100-A9/MRP14/CFAG/Calgranulin B  S100A9抗體規(guī)格: 0.1ml
CD5L/Api6  CD5L抗體規(guī)格: 0.2ml
hnRNP R  異質(zhì)性核糖核蛋白R(shí)規(guī)格: 0.2ml
RASSF1A  Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗體規(guī)格: 0.1ml
CD168/RHAMM  透明質(zhì)酸介導(dǎo)細(xì)胞游走受體抗體規(guī)格: 0.1ml
ARMER  ARMER抗體規(guī)格: 0.2ml
Classical swine fever virus, CSFV  豬瘟病毒抗體規(guī)格: 0.2ml
CC16/CCSP  克拉拉細(xì)胞蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
MAP3K9  絲裂原活化蛋白激酶3K9抗體規(guī)格: 0.2ml
Plexin A1  神經(jīng)叢蛋白A1抗體規(guī)格: 0.2ml
Casein  酪蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
CLDND1  膜蛋白CLDND1抗體規(guī)格: 0.1ml
Phospho-PFK2 (Ser467)  磷酸化6磷酸果糖激酶2抗體規(guī)格: 0.1ml
BIRC5/Survivin variant  細(xì)胞凋亡抑制因子5抗體規(guī)格: 0.2ml
ADAMTS10  整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶10型抗體規(guī)格: 0.1ml
PARP  多腺苷二磷酸多聚酶抗體/多聚ADP-核糖聚合酶1規(guī)格: 0.1ml50 次        柱式昆蟲 RNAout
20mg        MQAE( 氯離子熒光探針 )
10U        ATP 硫酸化酶
50 次        血液 DNAout
1mL        Rosetta(DE3)plysS 菌種
無(wú)機(jī)焦磷酸酶 ( 酵母 )    10U    130658-10
6nt 隨機(jī)引物 ( 抗水解 ),，0.5mM    100μL    120679-100
200mL        Western 印跡膜抗體清除劑
10mL        過(guò)氧化氫酶
25mL        DEAE 瓊脂糖凝膠 6B
250 mL        戊二醛二甲酸緩沖固定液
吐溫 -20    100mL    CAS9005-64-5
F12K 液體培養(yǎng)基 ( 無(wú)血清和雙抗 )    500mL    19-0071-500
柱式血液 DNA-RNAout    50 次    120522-50
100g        瓊脂糖
5g        D(+) 木糖
5次        大提柱式真菌 RNAout
1mL        一步式 RT-PCR Mix 
生物素化的堿性磷酸酶 (AP)    1mg    131096-1
ROX 參考染料 II    100μL    100931-100
2mL        UTP 溶液，2.5mM