需要而未提供的試劑和器材:
1. 產(chǎn)品僅用于科研標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
2. 高速離心機(jī)
3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱
4. 干凈的試管和Eppendof管
5. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭,,一次檢測(cè)樣品較多時(shí),,最好用多通道移液器
6. 蒸餾水,容量瓶等
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樣品準(zhǔn)備:
1)血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2)血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè),。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3)細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,,避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
使用方法:
測(cè)定法的靈敏度來(lái)自作為報(bào)告的酶,。酶是一種有機(jī)催化劑,,很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng),產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象,。因此該體系常被稱(chēng)為酶放大體系,。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。 24μg/ml 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12μg/ml 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6μg/ml 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3μg/ml 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5μg/ml 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,。|
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外,。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值),。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
注意事項(xiàng)
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未
用完,,板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,,洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,,以避免試驗(yàn)誤差,。一次加樣時(shí)間最好
控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,,推薦使用排槍加樣。
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,,最好做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本 OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測(cè)定,,計(jì)
算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染,。
6.底物請(qǐng)避光保存,。
7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異,,以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn),。
支原體PCR檢測(cè)試劑盒MYCO
IL12A & IL12B Others Human 人 IL12A & IL12B Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
CatS2 家貓皮膚成纖維樣細(xì)胞
CL-0070CRFK(貓腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
C2C12, 小鼠肌原細(xì)胞
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(傣族);KM9403 人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
支原體PCR檢測(cè)試劑盒MYCO
IL12A & IL12B Others Human 人 IL12A & IL12B Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
CatS2 家貓皮膚成纖維樣細(xì)胞
CL-0070CRFK(貓腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
C2C12, 小鼠肌原細(xì)胞
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(傣族);KM9403 人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
IFNG Others Mouse 小鼠 IFNG / Ierferon Gamma 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)
大鼠肝細(xì)胞;BRL 3A
L1210瘤 淋巴白血病
HCC 94 [HCC941122]人子宮鱗癌細(xì)胞(高分化) HCC 94 [HCC941122] in human uterine squamous cell carcinoma (high differeiation) RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS
FAM3D Protein Mouse 重組小鼠 FAM3D / Oit1 蛋白 (His 標(biāo)簽)
小鼠腎臟上皮細(xì)胞(MREpiC)(5×105) KM3, 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 Human
Ang-Ⅰ 人血管緊張素Ⅰelisa測(cè)定試劑盒Caco-2,人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 Human 現(xiàn)貨
人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
NCI-N87 [N87]人胃癌細(xì)胞 Human 現(xiàn)貨
人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞
服務(wù):
我們可以根據(jù)您的應(yīng)用需要,,比如在檢測(cè)范圍,、種屬以及靈敏度等方面有特殊要求,而量身定制檢測(cè)試劑盒,,有效控制檢測(cè)試劑成本,。并可提供免費(fèi)代測(cè)。公司產(chǎn)品僅用于科研