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小鼠雜交瘤細胞株,;AFB1B5圖片【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療,。
細胞名稱 小鼠雜交瘤細胞株,;AFB1B5圖片
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞屬專利保藏,其特征特性尚未公開,。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 未定
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),,90%,;優(yōu)質胎牛血清,10%,。
2,、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37攝氏度,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3,、凍存液:90%*培養(yǎng)基,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存,。
二、細胞處理:
1,、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或將細胞懸液加入10cm皿中,,加入約8ml培養(yǎng)基,,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細胞密度,。
2,、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞,,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,,細胞變圓脫落后,,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存,。懸浮細胞凍存時,,應將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,,少量保存上清液(防止細胞吸走),,加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存,。
質量保證:
我們的細胞株來源于ATCC,、ECACC、DSMZ,、JCRB等,,購買到貨后,由我們實驗室擴增,、凍存,,凍存的產品全部經過QC檢測,100%進口來源,,100%保證5代以內,,活力>95%,無細菌,、真菌,、支原體污染。 細胞到達客戶手中,,1個月內出現(xiàn)任何問題,,導致細胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次,。
操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養(yǎng)基,、PBS放入37℃水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內,,吸除或倒掉細胞瓶內舊培養(yǎng)液,,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,,使胰酶的量能蓋住細胞,,37℃孵育,,每隔2~3min顯微鏡下觀察,,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,,加入新鮮培養(yǎng)基,,晃動細胞瓶,終止胰酶作用,,用吸管小心吹打貼壁的細胞,,制成細胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產生大量的氣泡,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,,加入新鮮培養(yǎng)基,,置37℃溫箱培養(yǎng),,隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉移到無菌離心管內,,1000rpm離心5min,,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,,用吸管小心吹散沉淀,,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,,加入新鮮培養(yǎng)基,,置37℃溫箱培養(yǎng)。
pMP78
pNL2.2[NlucP Hygro]
pPCR-Script Amp(pPCRScriptAmp)
ppi25.7
pPZP211
pRBUBR1empty
pRS200
pSecTag2/Hygro A(pSecTag2HygroA)(60908-6101)
pSLAX13 Flag His (CT#245)(pSLAX13FlagHis)
pSV2-hph(pSV2hph)
pTC182
pTriEx-1.1 Neo(pTriEx1.1Neo)
pUCD4
pWH1266
pYES6/CT(pYES6CT)(60908-7080)
TAGZyme pQE-1(TAGZymepQE1)
YEp353
α-factor secretion signal
N6培養(yǎng)基
Alcanivorax balericus medium
Bacillus thermoalcalophilus medium
Chaetomium medium
Czapek peptone agar
Desulfurispirillum indicum mediumKAT13A/SRC1 類固醇受體激活蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml
COX3 細胞色素C氧化酶亞基3抗體規(guī)格: 0.2ml
MEP1A/Meprin alpha/PPHA 苯甲酸肽水解酶抗體規(guī)格: 0.1ml
RHEB Ras蛋白腦組織同源類似物RHEB蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
C11ORF77/HARBI1 11號染色體開放閱讀框77抗體規(guī)格: 0.2ml
Cystatin A 胱抑素A/半胱氨酸蛋白酶抑制劑A抗體規(guī)格: 0.2ml
Phospho-MDM2(Ser186) 磷酸化雙微體2基因抗體規(guī)格: 0.1ml
HCF2/Heparin Cofactor II 肝素輔助因子II抗體規(guī)格: 0.2ml
ADAM8 去整合素樣金屬蛋白酶8抗體 0.2ml
Mesothelioma 間質細胞蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
BAT5 白細胞抗原B相關轉錄蛋白5抗體規(guī)格: 0.2ml
Synaptotagmin 1/SYT1 突觸結合蛋白1抗體 0.2ml
phospho-LKB1(Ser428) 磷酸化絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶抗體規(guī)格: 0.1ml
CGI62/C8orf70 8號染色體開放閱讀框70抗體規(guī)格: 0.2ml
HHV8/ORF K14 人類皰疹病毒8 ORF14抗體 0.2ml
KLK13 激肽釋放酶13抗體規(guī)格: 0.1ml
TEF3/TEAD4 轉錄增強因子TEF3抗體規(guī)格: 0.2ml
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