詳細(xì)介紹
雜交瘤細(xì)胞,;SU-211-10圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 雜交瘤細(xì)胞,;SU-211-10圖片
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
生長特性 半貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞屬專利保藏,,其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,,3-4天傳1次
傳代情況 C6
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1,、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%。
2,、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%;二氧化碳,,5%,。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3,、凍存液:90%*培養(yǎng)基,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲(chǔ)存。
二,、細(xì)胞處理:
1,、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,,加入約8ml培養(yǎng)基,,培養(yǎng))。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2,、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺(tái),,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3,、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,,1000RPM條件下離心4分鐘,,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,,加入到凍存管中,,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來源于ATCC,、ECACC,、DSMZ、JCRB等,,購買到貨后,,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè),,100%進(jìn)口來源,100%保證5代以內(nèi),,活力>95%,,無細(xì)菌、真菌,、支原體污染,。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基,、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,,加少量PBS潤洗細(xì)胞,,加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,,37℃孵育,,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細(xì)胞間間隙變大,、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,終止胰酶作用,,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,,制成細(xì)胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產(chǎn)生大量的氣泡,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi),,加入新鮮培養(yǎng)基,,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長情況,。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),,1000rpm離心5min,棄去上清,,加入新鮮的培養(yǎng)基,,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,,置37℃溫箱培養(yǎng),。
脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Lipopolysaccharide Binding Protein (LBP)
半胱氨酸豐富分泌蛋白2(CRISP2)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Cysteine Rich Secretory Protein 2 (CRISP2)
肌微管素相關(guān)蛋白9(MTMR9)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Myotubularin Related Protein 9 (MTMR9)
核膜含血影蛋白重復(fù)蛋白1(Nesp1)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Nesprin 1 (Nesp1)
蛋白酶激活亞基3(PSME3)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Proteasome Activator Subunit 3 (PSME3)
復(fù)制啟動(dòng)因子1(REPIN1)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Replication Initiator 1 (REPIN1)
尿調(diào)蛋白(UMOD)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Uromodulin (UMOD)
受體活性修飾蛋白2(RAMP2)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Receptor Activity Modifying Protein 2 (RAMP2)
甲硫氨酰氨肽酶2(METAP2)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Methionyl Aminopeptidase 2 (METAP2)
亨廷頓蛋白(HTT)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Huntingtin (HTT)
D-氨基酸氧化酶(DAO)單克隆抗體Monoclonal Antibody to D-Amino Acid Oxidase (DAO)
苯胺素(ANLN)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Anillin (ANLN)
信號(hào)淋巴細(xì)胞激活分子家族成員7(SLAMF7)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Signaling Lymphocytic Activation Molecule Family, Member 7 (SLAMF7)
JNK1/MAPK8關(guān)聯(lián)膜蛋白(JKAMP)單克隆抗體Monoclonal Antibody to JNK1/MAPK8 Associated Membrane Protein (JKAMP)
Tolloid樣蛋白1(TLL1)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Tolloid Like Protein 1 (TLL1)
無翅型MMTV整合位點(diǎn)家族成員9B(WNT9B)單克隆抗體Monoclonal Antibody to Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 9B (WNT9B)100 T 一氧化氮檢測(cè)試劑盒 ( 化學(xué)法 )
2μg 克必隆 B 載體
50g 葡聚糖
500mL IMDM 培養(yǎng)基 ( 含 1% 雙抗 )
100mL DNA SDS 溶液,10%
一站式生物素檢測(cè) TUNEL 試劑盒 (DAB 法 ) 81026-10 10 次
DNA 電泳分子量標(biāo)準(zhǔn) (2)(300-5000 bp) 111108-50 50 次
25mg 生物素化的牛血清白蛋白
25g 疊氮
1Mu 青 G 鹽
1mL 螢火蟲熒光素
昆布多糖 CAS9008-22-4 100mg
抗凝血酶Ⅲ,,10mg/mL 130534-1 1mL
50 次 柱式糞便 RNAout
50μL Mito-Tracker Green( 線粒體綠色熒光探針 )
30 次 AMV cDNA *鏈合成試劑盒
50μL 電泳 SYBR Green I
0.1 mL×10 Stbl3 感受態(tài)細(xì)胞
CpG 甲基轉(zhuǎn)移酶 (M.SssI) 120511-100 100U
超快核酸轉(zhuǎn)膜試劑盒 121110-5 5次
5次 TdT 加尾法 DNA 標(biāo)記試劑盒
200mL 電泳丙烯酰胺溶液 ( 干粉型 )
2500mL TBE 電泳液 ,10×