詳細(xì)介紹
人膀胱移行細(xì)胞乳頭瘤細(xì)胞,;RT4圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療,。
細(xì)胞名稱 人膀胱移行細(xì)胞乳頭瘤細(xì)胞,;RT4圖片
形態(tài)特性 多角
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細(xì)胞來源于一名63歲白人男性的移行細(xì)胞乳頭狀瘤,可作為轉(zhuǎn)染宿主,。
培養(yǎng)條件 McCoy's 5A Media (Modified with Tricine) 10%FBS
傳代方法 1:2~1:4傳代,,每周2~3次。
傳代情況 P(175+5)
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 B類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1,、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,。
2,、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37攝氏度,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存,。
二,、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,,培養(yǎng)),。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2,、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),,可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,,細(xì)胞變圓脫落后,,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),,應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),,加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存,。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等,購買到貨后,,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增,、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,,100%進(jìn)口來源,,100%保證5代以內(nèi),,活力>95%,無細(xì)菌,、真菌,、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次,。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基,、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),,吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,,加少量PBS潤洗細(xì)胞,加入適量胰酶,,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,,待貼壁細(xì)胞間間隙變大,、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,,制成細(xì)胞懸液,。控制吹打的力度,,避免產(chǎn)生大量的氣泡,,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,,置37℃溫箱培養(yǎng),,隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),,1000rpm離心5min,,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,,用吸管小心吹散沉淀,,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi),,加入新鮮培養(yǎng)基,,置37℃溫箱培養(yǎng)。
真菌種屬鑒定 PCR Mix 2100 次
硫氧還蛋白5mg
131224-250Helly 固定液250 mL
傘形酮5g
#NAME?5g
CAS62610-50-8交聯(lián)瓊脂糖凝膠 6B100mL
60602-50柱式植物 DNAout50 次
石蠟包埋組織蛋白提取試劑盒50 次
瓊脂糖凝膠 2B100mL
核糖核酸酶 B100mg
核酸外切酶 III2500U
51208B-0.5dNTP 溶液 ,10mM0.5mL
膠原蛋白Ⅰ型1g
口腔角質(zhì)細(xì)胞生長因子5mL
穿刺培養(yǎng)基10 管Phenyllithium基鋰591-51-5
2-Iodo-5-(trifluoromethyl)benzyl bromide2-碘-5-三基溴芐702641-06-3
Coptisine chloride化黃連6020-18-4
Ethyl 3-methylvalerate3-基酸乙酯5870-68-8
Carboxyethylgermanium sesquioxide二羧乙基三氧化二鍺12758-40-6
Mandelic acid(R)-(-)-扁桃酸611-71-2
Trazodone hydrochloride酸曲唑25332-39-2
Bis(2-ethylhexyl) phosphate二(2-乙基己基)磷酸酯298-07-7
(R)-(+)-N-Benzyl-1-phenylethylamine(R)-(+)-N-芐基-1-乙胺38235-77-7
1,2-Bis(triethoxysilyl)ethane1,2-二(三乙氧基硅基)乙烷16068-37-4
Sodium orthovanadate釩酸13721-39-6
1,1,1,3,3-Pentafluoropropane1,1,1,3,3-五丙烷460-73-1
4-Chloro-3-nitrobenzoic acid4--3-基酸96-99-1
2-Chloro-4-nitroaniline2--4-基胺121-87-9
Tetramethylol acetylenediurea四羥基甘脲5395-50-6
1-(4-Chlorophenyl)-3-methyl-2-pyrazolin-5-one1-(4-基)-3-基-2-吡唑啉-5-13024-90-3
N-(tert-Butoxycarbonyl)-O-benzyl-D-threonineBoc-O-芐基-D-蘇氨酸69355-99-3
Hexamethylphosphoramide六磷酰三胺680-31-9
Formylhydrazine酰肼624-84-0
CAS6226-79-5麗春紅 S10g
91204-50動(dòng)植物膜蛋白微量制備試劑盒50 次
尿苷5g
一管式病毒 DNA-RNAout50 次