Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞,；231-Cas9-551圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療,。
細(xì)胞名稱 Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人乳腺癌細(xì)胞,；231-Cas9-551圖片
形態(tài)特性  上皮樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使MDA-MB-231細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Puromycin，經(jīng)2ug/ml嘌呤霉素篩選得到的單克隆,，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白,，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。 
培養(yǎng)條件  RPMI 1640 (w/o Hepes)  10%FBS,；2ug/ml Puromycin
傳代方法  1:2~1:4傳代,；每周2~3次,。
傳代情況 C3
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法（-）
STR  Amelogenin：x,x；CSF1PO：13,13,；D12S391：17,18,；D13S317：13,13；D16S539：12,12,；D18S51：11,16,；D19S433：11,14；D21S11：30,33.2,；D2S1338：20,21,；D3S1358：16,16；D5S818：12,12,；D6S1043：18,18,；D7S820：8,9；D8S1179：13,13,；FGA：22,23,；Penta E：11,11；TH01：7,9.3,；TPOX：8,9,；vWA：15,18；
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1,、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3,、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲(chǔ)存。
二,、細(xì)胞處理：
1,、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2,、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細(xì)胞懸起,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘,，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走）,，加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中,，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存,。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等，購(gòu)買到貨后,，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增,、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),，100%進(jìn)口來(lái)源,，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%,，無(wú)細(xì)菌,、真菌、支原體污染,。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中,，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次,。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,，加入適量胰酶,，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育,，每隔2~3min顯微鏡下觀察,，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,，加入新鮮培養(yǎng)基,，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用,，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況,。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),，1000rpm離心5min，棄去上清,，加入新鮮的培養(yǎng)基,，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液,，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng),。

接頭 DNA(pSma I)5nmol
CAS9004-54-0葡聚糖50g
12-206Rosetta-gami B(DE3) 菌種1mL
一步法 96 孔板質(zhì)粒 DNAout( 離心法 )1次
JM110 感受態(tài)細(xì)胞10×100μL
魚(yú)精蛋白硫酸鹽1g
乙烯乙二醇200mL
CAS51-35-4L- 羥基脯氨酸5g
60210-10硫酸鏈霉素溶液 ,50mg/mL10mL
印跡膜抗體稀釋液100mL
聚乙二醇 8000250g
次黃嘌呤1g
MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶 (H-)1000U
CAS69-57-8青霉素 G 鹽1g
131070-1牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,，2mg/mL1mL
重組蛋白 G1mg
LBA4404 農(nóng)桿菌菌種1mL
葡萄糖 -6- 磷酸脫氫酶1000U
雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（Annexin V- 熒光素 555·7-AAD）50 次
CAS29915-38-63- 三 ( 羥甲基 ) 甲基 -3- 氨基丙烷磺酸10g
80812-250考馬斯亮藍(lán) G-250 染液250mLBOC-D-SER-OMEBOC-D-絲氨酸酯95715-85-8
4-Chlorophenyl isocyanate對(duì)異酸酯104-12-1
BUTADIENE MONOXIDE環(huán)氧丁烷930-22-3
Diethylene glycol dibenzoate二酸二甘醇酯120-55-8
1-Methylimidazole1-基咪唑616-47-7
CI 42755胺蘭(水溶)28631-66-5
AMMONIUM POLYSULFIDE多硫化銨12259-92-6
SILICON NITRIDE氮化硅12033-89-5
Solvent Red 109溶劑紅10953802-03-2
Liriopeside B山麥冬皂苷B182284-68-0
3-(N,N-Dimethylpalmitylammonio)propanesulfonate3-磺丙基十六烷基二甜菜2281-11-0
4-Iodophenetole對(duì)碘699-08-1
Lithium sulfate monohydrate一水硫酸鋰10102-25-7
DIETHYL BENZYLPHOSPHONATE二乙基芐基膦酸酯1080-32-6
Ginsenoside Rd人參皂甙 Rd52705-93-8
1-ALLYL-3-METHYLIMIDAZOLIUM CHLORIDE化1-丙基-3-基咪唑65039-10-3
NA甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂
AMBERLITEAMBERLITE IRA402 CL陰離子交換樹(shù)脂52439-77-7
NA裨士麥棕Y
Methyl DL-mandelateDL-扁桃酸酯4358-87-6
1,3-BIS(DICYCLOHEXYLPHOSPHINO)PROPANE1,3 -雙（二環(huán)己膦基）丙烷103099-52-1
TIN錫7440-31-5
2-Ethylhexyl bromide溴代異烷18908-66-2
3-BROMOPROPIONITRILE3-溴2417-90-5
α- 酮戊二酸5g