詳細介紹
人乳腺癌細胞,;MCF7圖片【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,不可用于臨床診斷和治療,。
細胞名稱 人乳腺癌細胞,;MCF7圖片
形態(tài)特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞是從一名69歲的白人女性乳腺癌患者的胸腔積液中分離建立的。該細胞保留了多個分化乳腺上皮的特性,,包括:能通過胞質雌激素受體加工雌二醇并能形成隆突結構(domes),;該細胞表達WNT7B癌基因;TNF-α可以抑制MCF-7細胞的生長,;抗雌激素處理能調節(jié)細胞胰島素樣生長因子結合蛋白(IGFBP)的分泌,。
培養(yǎng)條件 DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
傳代方法 1:3~1:6傳代;每周2~3次。
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X,;CSF1PO:10,;D13S317:11;D16S539:11,,12,;D18S51:14;D19S433:13,,14,;D21S11:30;D2S1338:21,,23,;D3S1358:16;D5S818:11,,12,;D7S820:8,9,;D8S1179:10,,14;FGA:23,,24,,25;TH01:6,;TPOX:9,,12;vWA:14,,15,;
同工酶
染色體 72~84
使用權限 A類
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),,90%;優(yōu)質胎牛血清,,10%,。
2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37攝氏度,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3,、凍存液:90%*培養(yǎng)基,,10%DMSO,,現用現配。液氮儲存,。
二,、細胞處理:
1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,,培養(yǎng)),。第二天換液并檢查細胞密度。
2,、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞,,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,,棄去半數培養(yǎng)基后,,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3,、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,,再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時,,應將細胞收集,,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走),,加入部分新鮮培養(yǎng)基,,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存,。
質量保證:
我們的細胞株來源于ATCC,、ECACC、DSMZ,、JCRB等,,購買到貨后,由我們實驗室擴增,、凍存,,凍存的產品全部經過QC檢測,100%進口來源,,100%保證5代以內,,活力>95%,無細菌,、真菌,、支原體污染。 細胞到達客戶手中,,1個月內出現任何問題,導致細胞在凍存前死亡,,我們公司都可以免費再向客戶提供一次,。
操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內,,吸除或倒掉細胞瓶內舊培養(yǎng)液,,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,,使胰酶的量能蓋住細胞,,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,,待貼壁細胞間間隙變大,、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,,晃動細胞瓶,,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,,制成細胞懸液,。控制吹打的力度,,避免產生大量的氣泡,,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養(yǎng)基,,置37℃溫箱培養(yǎng),,隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉移到無菌離心管內,,1000rpm離心5min,,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,,用吸管小心吹散沉淀,,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,,加入新鮮培養(yǎng)基,,置37℃溫箱培養(yǎng)。
NCI-H838(人非小細胞肺細胞)5×106cells/瓶×2
NRK-52E,,大鼠腎細胞gersion
CW-2(人結腸細胞)5×106cells/瓶×2
mCF, 小鼠心臟成纖維細胞
KLE(人子宮內膜細胞)5×106cells/瓶×2
HELF(人胚肺成纖維細胞)5×106cells/瓶×2
中性紅染色液(活細胞染色用)規(guī)格:100ml
CHO(倉鼠卵巢細胞)5×106cells/瓶×2
小鼠角膜上細胞*培養(yǎng)基100mL
6-10B, 人鼻咽細胞系
人子宮頸表細胞英文名稱:MS751
BPL瓊脂/BPL Agar食品中沙門氏菌選擇性分離培養(yǎng)250克國產/進口
TMB Kit/TMB底物顯色試劑盒(可溶型)100ml100ml
胰蛋白酶(含10mL 酶解緩沖液)1mL
麥芽汁肉湯/麥芽浸膏湯/Malt Extract Broth酸性罐食品無菌試驗250克國產/進口
人胰腺星狀細胞*培養(yǎng)基100mL
EC肉湯/大腸桿菌檢驗肉湯/E.Coli Broth糞大腸菌群,、大腸桿菌的檢驗250克國產/進口
人臍動脈平滑肌細胞
V-P半固體瓊脂發(fā)酵管BR20支國產/進口
人肺大靜脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL1-EBIO (50 mg)1-ethyl-1,3-dihydro-2H-benzimidazol-2-one,; 1-Ethylbenzimidazolinone,; 1-EBIO
AGI-5198 (5 mg)N-[2-(cyclohexylamino)-1-(2-methylphenyl)-2-oxoethyl]-N-(3-fluorophenyl)-2-methyl-1H-imidazole-1-acetamide; AGI-5198
D-Luciferin (potassium salt) (100 mg)4,,5-dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4S-thiazolecarboxylic acid,, monopotassium salt,; D-Luciferin (potassium salt)
Costunolide (1 mg)3aS,4,,5,,8,9,,11aR-hexahydro-6E,,10E-dimethyl-3-methylene-cyclodeca[b]furan-2(3H)-one; Costus lactone|Melampolide|NSC 106404,; Costunolide
DPPH (50 mg)2,,2-diphenyl-1-(2,4,,6-trinitrophenyl)-hydrazinyl,; 2,2-Diphenyl-1-Picrylhydrazyl|DPPH radical,; DPPH
α-Truxillic Acid (10 mg)(1α,,2α,3β,,4β)-2,,4-diphenyl-1,3-cyclobutanedicarboxylic acid,; Gratissimic acid,; α-Truxillic Acid
L-(+)-Ergothioneine (50 mg)αS-carboxy-2,3-dihydro-N,,N,,N-trimethyl-2-thioxo-inner salt-1H-imidazole-4-ethanaminium; 2-Mercaotohistidine betaine|NSC 7175,; L-(+)-Ergothioneine
Ryanodine (1 mg)(3S,,4R,4aR,,6S,,6aS,7S,,8R,,8aS,8bR,,9S,,9aS)-dodecahydro-4,6,,7,,8a,,8b,9a-hexahydroxy-3,,6a,9-trimethyl-7-(1-methylethyl)-6,,9-methanobenzo[1,,2]pentale,6-bc]furan-8-yl ester-1H-pyrrole-2-carboxylic acid,; Ryanodine
PF-04981517 (10 mg)1-methyl-3-[1-methyl-5-(4-methylphenyl)-1H-pyrazol-4-yl]-4-[(3S)-3-(1-piperidinyl)-1-pyrrolidinyl]-1H-pyrazolo[3,,4-d]pyrimidine; CYP3cide,; PF-04981517