詳細(xì)介紹
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(彝族),;KM934圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,,不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(彝族),;KM934圖片
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞系來(lái)自一成年彝族男性的外周血,,中國(guó)科學(xué)院昆明細(xì)胞庫(kù)于1993年通過(guò)EB病毒轉(zhuǎn)化的方法建立。
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 15%NBS
傳代方法 1:2傳代,;5-6天一次
傳代情況 P10
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 熒光法(-)
STR -
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1,、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%。
2,、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37攝氏度,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3,、凍存液:90%*培養(yǎng)基,,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲(chǔ)存。
二,、細(xì)胞處理:
1,、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)),。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺(tái),,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,,將剩余細(xì)胞懸起,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3,、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,,1000RPM條件下離心4分鐘,,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,,加入到凍存管中,,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC,、ECACC,、DSMZ、JCRB等,,購(gòu)買到貨后,,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),,100%進(jìn)口來(lái)源,100%保證5代以內(nèi),,活力>95%,,無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染,。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次,。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),,吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,,加入適量胰酶,,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,37℃孵育,,每隔2~3min顯微鏡下觀察,,待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,,加入新鮮培養(yǎng)基,,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,,終止胰酶作用,,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液,??刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡,,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),,加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),,隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況,。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),1000rpm離心5min,,棄去上清,,加入新鮮的培養(yǎng)基,用吸管小心吹散沉淀,,制成細(xì)胞懸液,,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,,置37℃溫箱培養(yǎng),。
一站式大提柱式 miRNAout 5次
一站式蛋白質(zhì)非變性 PAGE 套裝 ( 低 pH) 30 次
一站式蛋白質(zhì)非變性 PAGE 套裝 ( 高 pH) 30 次
一站式蛋白質(zhì)非變性 PAGE 套裝 ( 中 pH) 30 次
一站式動(dòng)物 mRNAout 25 次
一站式平末端克隆試劑盒 20 次
一站式全血 mRNAout 25 次
一站式生物素 TUNEL 試劑盒 (FITC/POD) 10 次
一站式生物素檢測(cè) TUNEL 試劑盒 (DAB 法 ) 10 次
一站式乙酸 - 尿素 PAGE 電泳套裝 30 次
一站式長(zhǎng)效期 SDS-PAGE 電泳套裝 (>30KD) 30 次
一站式長(zhǎng)效期 SDS-PAGE 電泳套裝 (2-30KD) 30 次
一站式真菌 mRNAout 25 次
一站式植物 mRNAout 25 次
一站式柱式 miRNAout 50 次
伊紅 Y 二鈉鹽,水溶性 10g三水FeNaEDTA(100GM)FeNaEDTA,, 3H2O,, CAS# 15708-41-5,; MW 421.1
無(wú)水硫酸鎂(5KG)Magnesium Sulfate, Anhydrous,, CAS# 7487-88-9,; ≥98%
碳酸氫鈉溶液(100ML)Sodium Bicarbonate Solution, 7.5% solution (75 mg/ml) in purified water. Sterile filtered.
硫酸慶大霉素(1GM)Gentamicin Sulfate,, USP Grade,; CAS Number: 1405-41-0.
AMC[7-氨基-4-甲基香豆素] 可標(biāo)記多肽AMC [7-Amino-4-methylcoumarin] Validated for labeling peptides
6-TAMRA, SE [6-羧基四甲基羅丹明,,琥珀酰亞胺酯] 單體6-TAMRA,, SE [6-Carboxytetramethylrhodamine, succinimidyl ester] Single isomer
TQ3 胺Tide Quencher 3 amine [TQ3 amine]
5-FAM標(biāo)記的Asp天冬氨酸FMOC-Asp(5-FAM)-OH
酪蛋白,,TAMRA標(biāo)記Casein,, TAMRA-conjugated
Pluronic F-127 細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)Pluronic F-127 Cell culture tested
pH熒光探針 PDMPORatioWorks PDMPO
6-TEX氨基磷酸酯[5’-四氯熒光素氨基磷酸酯]6-TET phosphoramidite [5’-Tetrachlorofluorescein phosphoramidite]
DSG [Di(N-succinimidyl) glutarate]DSG [Di(N-succinimidyl) glutarate]
鬼筆環(huán)肽-iFluor 555偶聯(lián)物Phalloidin-iFluor 555 Conjugate
Cyanine 3胺 [相當(dāng)于Cy3胺]Cyanine 3 amine [equivalent to Cy3 amine]
伊紅 Y, 溶性 10g
衣霉素 5mg
衣霉素溶液 ,5mg/mL 1mL
胰蛋白胨 500g