人胚腎細(xì)胞-F克?。?93F圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研,，不可用于臨床診斷和治療,。
細(xì)胞名稱 人胚腎細(xì)胞-F克隆,；293F圖片
形態(tài)特性  上皮樣
生長特性 貼壁生長,；懸浮生長
特征特性   
培養(yǎng)條件   懸浮培養(yǎng)用特制無血清培養(yǎng)基；貼壁培養(yǎng)用MEM-EBSS + NEAA + 10%FBS
傳代方法 
傳代情況 
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法（-）
STR  Amelogenin：X,；CSF1PO：7,，12；D13S317：12,，14,；D16S539：,9,13；D18S51：17,18,；D6S1043：11,；D21S11：28,30.2；D2S1338：19,；D3S1358：15,17,；D5S818：8,9；D7S820：11,；D8S1179：12,14,；FGA：23；Penta E：15,；vWA：16,19；
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 B類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1,、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),，90%,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%,。
2,、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存,。
二,、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2,、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),，應(yīng)將細(xì)胞收集,，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走）,，加入部分新鮮培養(yǎng)基,，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存,。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC,、ECACC、DSMZ,、JCRB等,，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增,、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源,，100%保證5代以內(nèi),，活力>95%,，無細(xì)菌、真菌,、支原體污染。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中,，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次,。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基,、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,，加少量PBS潤洗細(xì)胞，加入適量胰酶,，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察,，待貼壁細(xì)胞間間隙變大,、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基,，晃動(dòng)細(xì)胞瓶,，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,，制成細(xì)胞懸液,。控制吹打的力度,，避免產(chǎn)生大量的氣泡,，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng),，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),，1000rpm離心5min,，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基,，用吸管小心吹散沉淀,，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng),。

T7 DNA 聚合酶 ( 未修飾 )    300U
T7 RNA 聚合酶    1000U
T7 RNA 聚合酶    25000U
T7 核酸內(nèi)切酶 I    250U
T7 核酸外切酶    1000U
T7 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒    50 次
T7 體外轉(zhuǎn)錄試劑盒    50 次
TAE 電泳液 ,50×    250mL
TAE 電泳液 ,50×    2500mL
Taq DNA 聚合酶    500U
Taq DNA 聚合酶    5000U
Taq DNA 連接酶    1000U
Taq 酶抗體    1000U
Taq 酶抗體    250U
TB1 感受態(tài)細(xì)胞    10×100μL
TB1 菌種    1mL
TBE 電泳液 ,10×    250mL
TBE 電泳液 ,10×    2500mLMMB2201 （5 mg）I-AMB； methyl （1-（5-fluoropentyl）-1H-indole-3-carbonyl）-L-valinate
Zalcitabine （100 mg）2’,3’-Dideoxycytidine|Hivid|NSC 606170|Ro 24-2027/000|ddC,； 2’,3’-dideoxy-cytidine
Prothionamide （5 g）Tebeform,； 2-propyl-4-pyridinecarbothioamide
5-hydroxy Tryptophol （25 mg）NSC 84416； 5-hydroxy-1H-indole-3-ethanol
Coenzyme A （100 mg）CoA,； coenzyme A
NU 6027 （5 mg）6-（cyclohexylmethoxy）-5-nitroso-2,4-pyrimidinediamine
ATB-346 （5 mg）4-
PBIT （25 mg）2-
O6-Benzylguanine （50 mg）NSC 637037,； 6-（phenylmethoxy）-9H-purin-2-amine
AB-CHMINACA metabolite M3A （5 mg）（1-（（4-hydroxycyclohexyl）methyl）-1H-indazole-3-carbonyl）-L-valine
GSK-LSD1 （hydrochloride） （1 mg）N-[（1R,2S）-2-phenylcyclopropyl]-4-piperidinamine, dihydrochloride
n-Dodecyl-β-D-maltoside （1 g）DDM|Dodecyl Maltoside； dodecyl 4-O-α-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranoside
BIBR 1532omerase Inhibitor X,； 2-[[（2E）-3-（2-naphthalenyl）-1-oxo-2-buten-1-yl]amino]-benzoic acid
PacritinibSB 1518,； 11-[2-（1-pyrrolidinyl）ethoxy]-14,19-dioxa-5,7,27-triazatetracyclo[19.3.1.12,6.18,12]heptacosa-1（25）,2,4,6（27）,8,10,12（26）,16E,21,23-decaene
OxolinicNSC 110364|Urinox； 5-ethyl-5,8-dihydro-8-oxo-1,3-dioxolo[4,5-g]quinoline-7-carboxylic acid
BRD73954 （10 mg）N1-hydroxy-N3-（2-phenylethyl）-1,3-benzenedicarboxamide
Asterric Acid （5 mg）Dimethylosoic Acid|RES-1214-1|TAN 1415A,； 2-（2-carboxy-3-hydroxy-5-methylphenoxy）-5-hydroxy-3-methoxy-benzoic acid, 1-methyl ester
N1-Acetylspermidine （hydrochloride） （1 mg）N1-AcSPD,； N-[3-[（4-aminobutyl）amino]propyl]-acetamide, dihydrochloride
TCEP 溶液，0.5M    5mL
TCEP 鹽酸膦    1g
TdT 加尾法 DNA 標(biāo)記試劑盒    5次
TdT 加尾法 DNA 地高標(biāo)記試劑盒    5次