人正常乳腺上皮細(xì)胞；MCF 10A圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研,，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人正常乳腺上皮細(xì)胞,；MCF 10A圖片
形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性  
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法  1:2,。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況97
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 B類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1,、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3,、凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存,。
二,、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2,、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),，應(yīng)將細(xì)胞收集,，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走）,，加入部分新鮮培養(yǎng)基,，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存,。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC,、ECACC、DSMZ,、JCRB等,，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增,、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源,，100%保證5代以內(nèi),，活力>95%,，無(wú)細(xì)菌,、真菌、支原體污染,。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中,，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次,。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量,，使的量能蓋住細(xì)胞,，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察,，待貼壁細(xì)胞間間隙變大,、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去，加入新鮮培養(yǎng)基,，晃動(dòng)細(xì)胞瓶,，終止作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,，制成細(xì)胞懸液,。控制吹打的力度,，避免產(chǎn)生大量的氣泡,，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng),，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),，1000rpm離心5min,，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基,，用吸管小心吹散沉淀,，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃

DNA  DTT( 二硫代蘇糖 )    10g
DNA  EDTA 2Na    100g
DNA  EDTA 溶液 ,0.5M,PH8.01     100mL
DNA  Guanidine HCl( 鹽酸胍 )    100g
DNA  GuSCN( 異硫氰酸胍 )    100g
DNA  PVP K30 溶液，20%    100mL
DNA  PVP K30( 聚乙烯基吡咯烷酮 K30)    100g
DNA  Sarkosyl 溶液,，10%    100mL
DNA  Sarkosyl( 十二烷基肌氨酸鈉 )    100g
DNA  SDS 溶液,，10%    100mL
DNA  SDS( 十二烷基硫酸鈉 )    100g
DNA  Tris Base( 三羥甲基氨基甲烷 )    100g
DNA  Tris HCl，1M,，pH6.5    100mL
DNA  Tris HCl,，1M，pH7.0    100mL
DNA  Tris HCl,，1M,，pH7.5    100mL
DNA  Tris HCl，1M,，pH8.0    100mL
DNA  Tris HCl,，1M,，pH8.5    100mLEpalrestat （25 mg）5Z-[（2E）-2-methyl-3-phenyl-2-propen-1-ylidene]-4-oxo-2-thioxo-3-thiazolidineacetic acid； Kinedak|ONO-2235|Sorbistat,； Epalrestat
Fluprostenol-d4 （500 ug）9α,，11α，15R-trihydroxy-16-（3-（trifluoromethyl）phenoxy）-17,，18,，19，20-tetranor-prosta-5Z,，13E-dien-1-oic-3,，3，4,，4-d4 acid,； 16-m-trifluoromethylphenoxy tetranor Prostaglandin F2α-d4； Fluprostenol-d4
Inulin Standard （2 mg）Inulin Standard
CP 47,，497-C9-homolog （5 mg）cis-5-（1,，1-dimethylnonyl）-2-（3-hydroxycyclohexyl）-phenol； CP 47,，497-C9-homolog
5-chloro AB-PINACA （1 mg）N-（1-amino-3-methyl-1-oxobutan-2-yl）-1-（5-chloropentyl）-1H-indazole-3-carboxamide,； 5-chloro AB-PINACA
Topiramate （500 mg）2，3:4,，5-bis-O-（1-methylethylidene）-β-D-fructopyranose 1-sulfamate,； Topamax |TPM|Epitomax|McN 4853|RWJ 17021； Topiramate
cis-4,10,13,16-Docosatetraenoic Acid （1 mg）4Z,10Z,13Z,16Z-docosatetraenoic acid
Rofecoxib （500 mg）MK 966|Vioxx,； 4-[4-（methylsulfonyl）phenyl]-3-phenyl-2（5H）-furanone
Piperine （100 g）Bioperine|N-Piperoylpiperidin|NSC 21727,； （2E,4E）-5-（1,3-benzodioxol-5-yl）-1-（1-piperidinyl）-2,4-pentadien-1-one
（±）9-HEPE （100 ug）（±）-9-hydroxy-5Z，7E,，11Z,，14Z，17Z-eicosapentaenoic acid,； （±）9-HEPE
（±）11-HETE （100 ug）（±）11-hydroxy-5Z,，8Z，12E,，14Z-eicosatetraenoic acid,； （±）11-HETE
（±）-Jasmonic Acid （250 mg）3-oxo-2R-（2Z）2-penten-1R-yl-cyclopentaneacetic acid,； （±）-Jasmonic Acid
Thrombin （human） （100 U）Activated Factor II [IIa]
JNJ-10397049 （10 mg）N-（2,4-dibromophenyl）-N’-[（4S,5S）-2,2-dimethyl-4-phenyl-1,3-dioxan-5-yl]-urea
NMDA （250 mg）N-Methyl-D-Aspartic Acid,； N-methyl-D-aspartic acid
25I-NBOH （hydrochloride） （5 mg）2；C-I-NBOH,； 2-（（（4-iodo-2,5-dimethoxyphenethyl）amino）methyl）phenol, monohydrochloride
DNA  Tris HCl,，1M,，pH9.0    100mL
DNA  Triton    100mL