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轉(zhuǎn)化細(xì)胞常用純化方法
閱讀：75 發(fā)布時(shí)間：2017-9-8 轉(zhuǎn)化細(xì)胞人工純化是利用人為手段造成對(duì)某一細(xì)胞生長有利的環(huán)境條件,，抑制其他細(xì)胞的生長從而達(dá)到純化細(xì)胞的目的,。
1、細(xì)胞時(shí)間差酶消化法：
酶消化法是比較常用的純化方法,，不僅對(duì)貼壁細(xì)胞可行,，能利用上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞對(duì)胰蛋白酶的耐受性不同，是兩者分開,，達(dá)到純化的目的,；另外對(duì)貼壁細(xì)胞與半貼壁細(xì)胞及黏附細(xì)胞間的分離純化也是十分有效的。
兩者在胰蛋白酶的作用下,，由于成纖維細(xì)胞先脫壁,，而上皮細(xì)胞要消化相當(dāng)長的時(shí)間才脫壁，特別是在原代細(xì)胞初次傳代和早期傳代中兩種差別尤為明顯,，故可采用多次差別消化方法將上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞分開,，方法步驟如下：
采用常規(guī)消化傳代方式將0.25%胰蛋白酶注入培養(yǎng)瓶內(nèi)兩次，每次加1ml（25ml培養(yǎng)瓶）,，來回輕搖1-2次,，使胰蛋白酶流過所有細(xì)胞表面，然后倒掉,。
蓋好瓶塞,，將培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞變園,，部分脫落,，立即加入2ml有血清的培養(yǎng)基終止消化,。
用彎頭吸管輕輕吹打成纖維細(xì)胞生長區(qū)域（可事先在鏡下用記號(hào)筆在培養(yǎng)瓶上劃出記號(hào)）。吹打時(shí)不要用力,，也不要吹打上皮細(xì)胞生長區(qū)域,。吹打結(jié)束后，再用少量培養(yǎng)基漂洗一遍,，然后加入適量培養(yǎng)基于瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng),，也可重復(fù)上述操作再進(jìn)行一次。
隔幾日后或下次傳代時(shí),，再進(jìn)行上述操作,，進(jìn)過幾次處理，就可將成纖維細(xì)胞去除或者將兩者分開,。
2,、細(xì)胞培養(yǎng)機(jī)械刮除法：
原代培養(yǎng)時(shí)，如果上皮轉(zhuǎn)化細(xì)胞和成纖維細(xì)胞分為區(qū)成混雜生長,，每種細(xì)胞都以小片或區(qū)域性分布的方式生長在瓶壁上,。可采用機(jī)械的方法去除不需要的細(xì)胞區(qū)域而保留需要的細(xì)胞區(qū)域,，其方法步驟如下 ：
將要純化細(xì)胞的培養(yǎng)瓶,，在凈化室內(nèi)放在倒置顯微鏡監(jiān)視下進(jìn)行操作。
用硅橡膠刮子在不需要生長的細(xì)胞區(qū)域推劃,，使細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)基中,，注意不要傷及所需細(xì)胞。
推劃后用培養(yǎng)基沖洗振搖兩次倒掉,，即可將培養(yǎng)基加入原瓶繼續(xù)培養(yǎng),。
數(shù)日后如發(fā)現(xiàn)不需要的細(xì)胞又長出，可再進(jìn)行上述操作,，這樣反復(fù)多次可以純化細(xì)胞,。操作過程中要嚴(yán)格無菌操作，防止污染,。
≥98% 規(guī)格: *： Curcumol 莪術(shù)醇
≥98% 規(guī)格: *： (+)-Catechin 兒茶素
≥96% 規(guī)格: *： Dihydrotanshinone I 二氫丹參酮 I
≥95% 規(guī)格: *： Dihydrocapsaicin 二氫辣椒堿
≥99% 規(guī)格: *： Dihidromethysticin 二氫麻醉椒苦素
≥97% 規(guī)格: *： Columbianadin 二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯
≥98% 規(guī)格: *： Dihydrolycorine 二氫石蒜堿
轉(zhuǎn)化細(xì)胞