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轉(zhuǎn)化細(xì)胞常用純化方法

時(shí)間:2017-9-8閱讀:113
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  轉(zhuǎn)化細(xì)胞人工純化是利用人為手段造成對(duì)某一細(xì)胞生長有利的環(huán)境條件,抑制其他細(xì)胞的生長從而達(dá)到純化細(xì)胞的目的,。
1,、細(xì)胞時(shí)間差酶消化法:
酶消化法是比較常用的純化方法,,不僅對(duì)貼壁細(xì)胞可行,,能利用上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞對(duì)胰蛋白酶的耐受性不同,是兩者分開,,達(dá)到純化的目的;另外對(duì)貼壁細(xì)胞與半貼壁細(xì)胞及黏附細(xì)胞間的分離純化也是十分有效的,。
兩者在胰蛋白酶的作用下,,由于成纖維細(xì)胞先脫壁,而上皮細(xì)胞要消化相當(dāng)長的時(shí)間才脫壁,,特別是在原代細(xì)胞初次傳代和早期傳代中兩種差別尤為明顯,,故可采用多次差別消化方法將上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞分開,方法步驟如下:
采用常規(guī)消化傳代方式將0.25%胰蛋白酶注入培養(yǎng)瓶內(nèi)兩次,,每次加1ml(25ml培養(yǎng)瓶),,來回輕搖1-2次,使胰蛋白酶流過所有細(xì)胞表面,,然后倒掉,。
蓋好瓶塞,將培養(yǎng)瓶放在倒置顯微鏡下觀察,,發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞變園,,部分脫落,立即加入2ml有血清的培養(yǎng)基終止消化。
用彎頭吸管輕輕吹打成纖維細(xì)胞生長區(qū)域(可事先在鏡下用記號(hào)筆在培養(yǎng)瓶上劃出記號(hào)),。吹打時(shí)不要用力,,也不要吹打上皮細(xì)胞生長區(qū)域。吹打結(jié)束后,,再用少量培養(yǎng)基漂洗一遍,,然后加入適量培養(yǎng)基于瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng),也可重復(fù)上述操作再進(jìn)行一次,。
隔幾日后或下次傳代時(shí),,再進(jìn)行上述操作,進(jìn)過幾次處理,,就可將成纖維細(xì)胞去除或者將兩者分開,。
2、細(xì)胞培養(yǎng)機(jī)械刮除法:
原代培養(yǎng)時(shí),,如果上皮轉(zhuǎn)化細(xì)胞和成纖維細(xì)胞分為區(qū)成混雜生長,,每種細(xì)胞都以小片或區(qū)域性分布的方式生長在瓶壁上??刹捎脵C(jī)械的方法去除不需要的細(xì)胞區(qū)域而保留需要的細(xì)胞區(qū)域,,其方法步驟如下 :
將要純化細(xì)胞的培養(yǎng)瓶,在凈化室內(nèi)放在倒置顯微鏡監(jiān)視下進(jìn)行操作,。
用硅橡膠刮子在不需要生長的細(xì)胞區(qū)域推劃,,使細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)基中,注意不要傷及所需細(xì)胞,。
推劃后用培養(yǎng)基沖洗振搖兩次倒掉,,即可將培養(yǎng)基加入原瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
數(shù)日后如發(fā)現(xiàn)不需要的細(xì)胞又長出,,可再進(jìn)行上述操作,,這樣反復(fù)多次可以純化細(xì)胞。操作過程中要嚴(yán)格無菌操作,,防止污染,。
≥98%    規(guī)格:        *:    Curcumol    莪術(shù)醇    
≥98%    規(guī)格:        *:    (+)-Catechin    兒茶素    
≥96%    規(guī)格:        *:    Dihydrotanshinone I    二氫丹參酮 I    
≥95%    規(guī)格:        *:    Dihydrocapsaicin    二氫辣椒堿    
≥99%    規(guī)格:        *:    Dihidromethysticin    二氫麻醉椒苦素    
≥97%    規(guī)格:        *:    Columbianadin    二氫歐山芹醇當(dāng)歸酸酯    
≥98%    規(guī)格:        *:    Dihydrolycorine    二氫石蒜堿  
轉(zhuǎn)化細(xì)胞 

 

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