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ATCC細(xì)胞因子的溶解方法介紹
閱讀:290 發(fā)布時(shí)間:2017-3-27ATCC細(xì)胞因子中不含載體蛋白或其他添加劑,,并且通常以zui少量的鹽來(lái)進(jìn)行凍干處理,因此微量的細(xì)胞因子在凍干過(guò)程中會(huì)沉積于管內(nèi),,形成很薄或不可見(jiàn)的蛋白層。所以我們建議在收到產(chǎn)品后,,務(wù)必在開(kāi)蓋前先離心,,使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底(此時(shí)能否見(jiàn)到白色沉淀均屬正常現(xiàn)象),。
1.離心:高速離心20-30秒,,或低速離心5分鐘。
2.溶解:細(xì)胞因子用去離子水或其它緩沖液溶解至說(shuō)明書(shū)要求的濃度 (一般為 0.1-1.0 mg/mL,如10ug的產(chǎn)品,,需用10uL-100uL的去離子水或緩沖液溶解),。溶解時(shí)不可振蕩,避免因化學(xué)鍵的斷裂造成蛋白失活,,可加入適當(dāng)?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時(shí)間,,待ATCC細(xì)胞因子*溶解后使用,。溶劑的選擇:
(1)要求用去離子水溶解的產(chǎn)品,務(wù)必不可用鹽溶液,,避免過(guò)高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出,;
(2)要求用鹽溶液溶解的產(chǎn)品,,請(qǐng)依照細(xì)胞因子說(shuō)明書(shū)上的濃度,,同樣也是為了避免過(guò)高的鹽濃度,。
3.分裝和貯存:ATCC細(xì)胞因子蛋白溶解后可根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)一步稀釋成工作液,,稀釋可用RPMI 1640,、DMEM或PBS等溶液,,其中含有5-10%的FCS (小牛或胎牛血清)或0.5 %的BSA(牛血清白蛋白)來(lái)穩(wěn)定蛋白。工作液在4℃可保存1周,如需長(zhǎng)期保存,,則需分裝凍存于-20℃ (注意:不可凍存于-80℃)。分裝時(shí)每管中工作液的體積是一次實(shí)驗(yàn)的用量,以實(shí)現(xiàn)每次實(shí)驗(yàn)用完一只工作液,,避免反復(fù)凍融引起蛋白活性的降低,。