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干細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的關(guān)鍵

閱讀:209          發(fā)布時(shí)間:2018-4-25

對(duì)干細(xì)胞進(jìn)行單個(gè)分離,、研究,、和比較有助于細(xì)胞異質(zhì)性和基因組不穩(wěn)定研究。zui常見(jiàn)的單細(xì)胞測(cè)序應(yīng)用是在腫瘤研究領(lǐng)域,。哈佛大學(xué)終身教授,、美國(guó)科學(xué)院院士謝曉亮教授是單細(xì)胞測(cè)序其中一種技術(shù)路線的人,。

2015年謝教授課題組在單細(xì)胞全基因測(cè)序研究領(lǐng)域曾取得重要進(jìn)展,利用“eWGA”擴(kuò)增方法,,大幅提高了擴(kuò)增的均勻性和準(zhǔn)確性,,可同時(shí)檢測(cè)出單細(xì)胞中的小片段拷貝數(shù)變異和高精度的單核苷酸變異,該方法還具有基因組的高覆蓋率,,有效降低外源污染,。  

這是一項(xiàng)經(jīng)過(guò)改良的單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增(whole-genome amplification,WGA)方法,,被稱為“通過(guò)轉(zhuǎn)座子插入的線性放大(Linear Amplification via Transposon Insertion,,LIANTI)”。利用Tn5轉(zhuǎn)座子(含T7啟動(dòng)子)隨機(jī)將DNA切碎,,使得DNA樣本得以線性放大,。

WGA是單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)的關(guān)鍵。目前的WGA技術(shù)方法仍存在一些局限性,,比如準(zhǔn)確度,、基因拷貝數(shù)空間分辨率、保真度都有待提高,。

為了應(yīng)對(duì)這些問(wèn)題,,不僅需要從技術(shù)改進(jìn)下手,謝教授課題組還提出了“構(gòu)建無(wú)偏見(jiàn)細(xì)胞基因組文庫(kù)(making an unbiased library)”的概念,。
研究還發(fā)現(xiàn),,干細(xì)胞基因組中所觀察到的主要的胞嘧啶到胸腺嘧啶(C-T)的突變,通常起因于人工進(jìn)行的細(xì)胞裂解操作,,這一操作導(dǎo)致了胞嘧啶的脫氨基作用,。至于如何改善這種不可避免的誤差。研究人員提出可以通過(guò)與同類細(xì)胞的序列進(jìn)行比較得以修正,。本篇報(bào)道已鑒定出單個(gè)人類細(xì)胞的SNVs頻譜,,揭示了SNVs在全基因組內(nèi)的非隨機(jī)分布。

1,3-二硝基苯 標(biāo)準(zhǔn)品 CDCP-O-815-5g 乙酰丙酮 1ml 5g

L-(+)-谷氨suan CDCP-O-807-10g 異佛爾酮 1g 10g

鄰苯二甲suan二異丁酯(DIBP) ... CDCP-O-48-10g 葡萄糖suan 10ml 10g

沙丁胺醇(無(wú)證書(shū)) 標(biāo)準(zhǔn)品 CDCP-O-416-10G 醋suan異辛酯 50mg 10g

乙醛 CDCP-O-362-5g 3-lv苯胺 1g(4℃保存),,有證書(shū) 5g

乙醛 CDCP-O-2344-5g 3-lv苯酚 1000ug/ml于乙腈,,5ml 5g

干細(xì)胞

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