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轉(zhuǎn)化細(xì)胞鋪勻的技巧

時(shí)間:2018-4-16閱讀:305
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轉(zhuǎn)化細(xì)胞實(shí)驗(yàn),,細(xì)胞鋪板大概是zui常見(jiàn)的一個(gè)實(shí)驗(yàn)了,。但是有很多人不是很得要領(lǐng),,鋪得不是均勻:要么中間密周圍稀,要么周圍密中間禿頂,。以下是我的一些技巧,,希望可以幫助到大家,。
1.一般96孔板我每孔是加100微升細(xì)胞懸液,從孔的左邊靠近底部加入,,加完半邊板后,,將未加的細(xì)胞懸液混一下再,繼續(xù)加剩余的半邊板子,,都加完后蓋上蓋子,,左手輕輕扶住板的左邊,右手輕輕敲擊板的右邊緣,,注意把握力度(我一般輕巧敲三下),,太強(qiáng)或次數(shù)太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞集中成堆,將板順時(shí)針旋轉(zhuǎn)(逆時(shí)針效果不好),,依次敲擊剩余三個(gè)邊,,靜置約5分鐘,放入37度培養(yǎng)箱,。
6孔板12孔板或24孔板,我均采用將*個(gè)孔加入少量無(wú)血清培養(yǎng)基,,晃動(dòng)浸潤(rùn)整個(gè)孔底,,然后用移液槍吸至第二孔,同樣方法浸潤(rùn)孔底,,其它孔一次類推,,這樣整個(gè)孔底都是濕潤(rùn)的,細(xì)胞懸液會(huì)平鋪在整個(gè)孔底,,加細(xì)胞懸液的時(shí)候可以避免加在中間中間細(xì)胞多,,而加在周邊晃勻后周邊細(xì)胞多中間少的現(xiàn)象,細(xì)胞分散較均勻,,注意加完細(xì)胞懸液后要放工作臺(tái)靜置一下,。這個(gè)方法就是有點(diǎn)慢,但操作熟練了也不慢,。也可以采用輕拍的方式,,但力度沒(méi)有96孔板好掌握,效果沒(méi)有96孔板好,,所以我放棄改用浸潤(rùn)孔底的方法,。
2. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞懸液加完后,將細(xì)胞培養(yǎng)板抬高,,對(duì)著燈光,,從底部往上看,看細(xì)胞有沒(méi)有抱團(tuán),。然后從底部敲擊,,使之分散,。
3.如果實(shí)驗(yàn)室有平板振蕩器的話,我建議用這個(gè)儀器稍振蕩一下,,效果不錯(cuò),,就是振幅小,頻率高的那種,。
4.轉(zhuǎn)化細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞要盡量打散,,大部分呈單個(gè)狀態(tài)。離心后,,要充分懸?。∵€有轉(zhuǎn)移到六孔板后,,是要晃得,!晃的時(shí)候不要讓那個(gè)細(xì)胞液轉(zhuǎn)圈,不然細(xì)胞就全被帶到中間去了,,就會(huì)不均勻,!
100215-200601    檢查用    100mg    乙羥茶堿
100216-200702    含量測(cè)定    100mg    鹽酸安他唑啉
100218-199601    含量測(cè)定    50mg    鹽酸美西律
100219-199902    含量測(cè)定    50mg    鹽酸酚芐明
100222-200702    鑒別    50mg    鹽酸羅通定
100223-200102    含量測(cè)定    50mg    鹽酸維拉帕米
100224-200903    含量測(cè)定    100mg    異維A酸
100225-200502    含量測(cè)定    100mg    貝諾酯
100226-200404    含量測(cè)定    50mg    半乳糖
100227-201001    供UV法含量測(cè)定    30mg    醋酸去氧皮質(zhì)酮
100228-199802    含量測(cè)定    50mg    醋酸甲萘氫醌
100229-200803    HPLC法含量測(cè)定    100mg    富馬酸氯馬斯汀
轉(zhuǎn)化細(xì)胞

 

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