Wistar大鼠處死,，腫瘤細胞迅速取出胸主動脈，浸泡在含無菌PBS的表面皿中,，轉(zhuǎn)移到無菌超凈臺,。在表面皿中漂洗主動脈去除殘留的血跡,，縱向剪開主動脈,，把主動脈鋪平并使內(nèi)膜朝上，用鑷子來回刮除內(nèi)膜層,，剝離血管中膜,。將剝離的血管中膜用眼科剪剪碎，碎片大小在1 mm×1 mm左右,。裝入含0.25%胰酶的玻璃培養(yǎng)瓶中于37℃條件下消化,。當在顯微鏡下觀察組織塊表面出現(xiàn)大量細胞時應(yīng)立即加入血清終止消化,，一般消化的時間在 3.5 h。終止消化后將玻璃培養(yǎng)瓶置于37℃空氣搖床振搖10 min,，繼續(xù)用吹打的方法使組織塊表面的細胞盡可能脫落。待細胞從組織塊脫離后,，120目細胞篩過濾，轉(zhuǎn)入離心管內(nèi)離心,，棄上清,，用含20%小牛血清的 DMEM培養(yǎng)基吹打細胞，zui后接種于25 mL培養(yǎng)瓶,，放入CO2孵箱培養(yǎng),，48 h后換液。
細胞融合后,，倒去舊的培養(yǎng)液，加入適量的0.25%胰酶,，顯微鏡下觀察，見細胞收縮后去除消化液,，加入適量培養(yǎng)液,，吹打細胞，以1∶2接種于新培養(yǎng)瓶中,，補足培養(yǎng)液，放入37℃,、5%CO2孵箱培養(yǎng),。傳代細胞從第三代開始可換用含10%小牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng),。VSMC 至少可以傳16代以上,，并且從第二代開始平滑肌細胞即可凍存,。
相差顯微鏡下，腫瘤細胞未匯合之前多數(shù)呈梭形,，至匯合后,，部分區(qū)域細胞束狀排列,，呈典型的“峰和谷”狀態(tài)。將傳代獲得的平滑肌細胞接種于蓋玻片上,，3~4天后至亞匯合狀態(tài),，取出細胞爬片，PBS清洗后用4℃純丙酮固定15~30 min,，自然晾干。采用小鼠抗大鼠α-肌動蛋白抗體免疫組織化學染色鑒定VSMC肌動蛋白,。根據(jù)S-P免疫組織化學染色的常規(guī)方法,，以平滑肌細胞胞漿棕黃色為陽性結(jié)果。
400mg    Mitoxantrone Hydrochloride     70476-82-3     鹽酸米托蒽醌標準品
400mg    Meloxicam     71125-38-7     美洛昔康標準品
400mg    Mafenide Acetate    13009-99-9     醋酸磺胺米隆標準品
400mg    Levocarnitine     541-15-1     左卡尼汀標準品
400mg    Ioxilan    107793-72-6     碘昔蘭標準品
400mg    Iopromide     73334-07-3     碘普羅胺標準品
400mg    Etodolac    41340-25-4    依托度酸標準品
400mg    Cloprostenol Sodium    55028-72-3    氯前列烯醇鈉標準品
400mg    Climbazole    38083-17-9    苯咪丁酮標準品
400mg    Ciprofloxacin Hydrochloride    86393-32-0    鹽酸環(huán)丙沙星標準品
腫瘤細胞