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魚組胺(HIS)ELISA試劑盒說明書

魚組胺(HIS)ELISA試劑盒 優(yōu)勢：

1,、原裝抗體----高效、靈敏、特異性好

2,、規(guī)范包被操作----吸附均勻、吸附性好,、空白值低,、孔底透明度高

3、先進的優(yōu)化方案----重復(fù)性高,，可靠性強

4,、高標準技術(shù)服務(wù)要求：靈敏度高，特異性強 

5、適用范圍廣：血漿,、血清,、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液,、尿液等多種類型的樣本

魚組胺(HIS)ELISA試劑盒檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預(yù)先包被組胺（HIS）抗體的包被微孔中，依次加入標本,、標準品,、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的組胺（HIS）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度,。

樣品收集,、處理及保存方法

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激,，收集血液后,，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

自備物品

?酶標儀（450nm）

?高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL

?37℃恒溫箱

魚組胺(HIS)ELISA試劑盒操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,，這屬于正?，F(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用,。

2.  實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存,。

3.  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白,；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍，終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度,。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間,、加液量及順序進行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻,。

試劑盒組成

名稱96孔配置48孔配置備注

微孔酶標板12孔×8條12孔×4條無

標準品0.3mL*6管0.3mL*6管無

樣本稀釋液6mL3mL無

檢測抗體-HRP10mL5mL無

20×洗滌緩沖液25mL15mL按說明書進行稀釋

底物A6mL3mL無

底物B6mL3mL無

終止液6mL3mL無

封板膜2張2張無

說明書1份1份無

自封袋1個1個無

注：標準品（S0-S5）濃度依次為：0,、12.5、25,、50,、100、200 mg/L

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干，如此洗板5次,。

2.  自動洗板機：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min，洗板5次,。

魚組胺(HIS)ELISA試劑盒操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；

3.  樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL,；空白孔不加,。

4.  除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結(jié)果判斷

 繪制標準曲線：在Excel工作表中,，以標準品濃度作橫坐標,，對應(yīng)OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線,，按曲線方程計算各樣本濃度值,。

試劑盒性能

? 準確性：標準品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900,。

? 靈敏度：低檢測濃度小于1.0 mg/L,。

? 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

? 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%,。

? 貯藏：2-8℃，避光防潮保存,。

? 有效期：6個月

免責(zé)聲明

?  試劑盒僅供研究使用,，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果,，由實驗者承擔,，本公司概不負責(zé)。

?  嚴格按照說明書操作,，實驗者違反說明書操作,，后果由實驗者承擔。