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小鼠組蛋白H2b(histon-H2b)elisa試劑盒說(shuō)明書
閱讀：69 發(fā)布時(shí)間：2022-4-22| 提 供 商 | 上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 13.9KB |
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小鼠組蛋白H2b(histon-H2b)elisa試劑盒說(shuō)明書
ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù),，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病,、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷,。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定,，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,，認(rèn)為ELISA法具有靈敏,、特異、簡(jiǎn)單,、快速,、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查,，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此,，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來(lái)測(cè)定抗體,，而且也可用于測(cè)定體液中的循環(huán)抗原,，所以也是一種早期診斷的良好方法,。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大，可概括四個(gè)方面：
1,、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位,。
2、研究抗酶抗體的合成,。
3,、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。
4,、定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份,。
組成 :
試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
說(shuō)明書 1份 1份
封板膜 2片（48） 2片（96）
密封袋 1個(gè) 1個(gè)
酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品 0.3ml×6瓶 0.3ml×6瓶 2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
檢測(cè)抗體-HRP 5ml×1瓶 10ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑A液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑B液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
20*洗滌緩沖液 25ml×1瓶 15ml×1瓶 2-8℃保存
需自備的設(shè)備及試劑：
1.450±10nm濾光片酶標(biāo)儀（建議儀器使用前預(yù)熱）
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL.
3.Eppendorf 移液器.
4.蒸餾水或去離子水.
5.脫脂棉吸水紙.
6.37℃恒溫箱.
7.100ml和1000ml量筒.
8.準(zhǔn)備若干個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品稀釋管.
注意事項(xiàng)
1.試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請(qǐng)立即按照說(shuō)明書要求保存,。實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭,，避免交叉污染。
2．加樣：加樣時(shí),，要控制加樣速度,，避免*孔與zui后一孔之見的時(shí)間間隔過(guò)大，否則將會(huì)導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時(shí)間,，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性,；一般加樣時(shí)間控制在10分鐘內(nèi)，如果樣本數(shù)量過(guò)多,，可使用多道移液器,。
3.孵育：樣品要在密閉的容器內(nèi)進(jìn)行孵育，嚴(yán)格按照說(shuō)明書上規(guī)定的孵育時(shí)間和溫度進(jìn)行,。
4.洗滌：洗滌過(guò)程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指痕跡，避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù),。
5.反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,，10分鐘左右)，如果顏色較深,，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),。
6.建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高,，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,，計(jì)算結(jié)果時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
7.建議使用本試劑盒時(shí)先做預(yù)實(shí)驗(yàn)(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，試用幾個(gè)標(biāo)本),，如果對(duì)本試劑盒有任何疑問(wèn),，可和所購(gòu)經(jīng)銷商，如果因運(yùn)輸過(guò)程導(dǎo)致試劑盒失效,，可要求調(diào)換,，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失。
操作步驟
1. 取出試劑盒,，于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘,。實(shí)驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在室溫(20-25℃)內(nèi)進(jìn)行。
2. 取出酶標(biāo)板,，按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中,。
3. 空白微孔中加入50μl的樣品，空白對(duì)照加入50μl的蒸餾水,；
4. 在樣品孔中加入10μl的生物素,；(不含空白對(duì)照孔,切忌：生物素只加樣品孔！)
5. 在各孔中加入100μl的酶標(biāo)記溶液,；(不含空白對(duì)照孔)
6. 將酶標(biāo)板用封口膠密封后，37℃孵育反應(yīng) 1小時(shí),；(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)
7. 充分清洗酶標(biāo)板3-5次,，保持各孔有充足的水壓；(濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋)
8. 酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙*拍干,；
9. 各孔加入顯色劑A,、B液各50μl；(不含空白對(duì)照孔)
10. 20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘,；
11.各孔加入50μl終止液,，終止反應(yīng)；
結(jié)果判斷
1. 30分鐘內(nèi)在波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值,；
2. 以O(shè)D值為縱坐標(biāo),，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，繪制曲線圖,；
3. 根據(jù)樣品的OD值查找對(duì)應(yīng)的濃度范圍,；