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人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)elisa試劑盒說明書
閱讀：75 發(fā)布時間：2022-3-25| 提 供 商 | 上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 13.6KB |
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人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)elisa試劑盒說明書
ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù),，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷,。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,，認(rèn)為ELISA法具有靈敏,、特異、簡單,、快速,、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查,，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此,，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來測定抗體,，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大,，可概括四個方面：
1,、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。
2,、研究抗酶抗體的合成,。
3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng),。
4,、定量檢測體液中抗原或抗體成份,。
組成 :
試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存
說明書 1份 1份
封板膜 2片（48） 2片（96）
密封袋 1個 1個
酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品 0.3ml×6瓶 0.3ml×6瓶 2-8℃保存
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
檢測抗體-HRP 5ml×1瓶 10ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑A液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
顯色劑B液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
終止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
20*洗滌緩沖液 25ml×1瓶 15ml×1瓶 2-8℃保存
人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)elisa試劑盒需自備的設(shè)備及試劑：
1.450±10nm濾光片酶標(biāo)儀（建議儀器使用前預(yù)熱）
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL.
3.Eppendorf 移液器.
4.蒸餾水或去離子水.
5.脫脂棉吸水紙.
6.37℃恒溫箱.
7.100ml和1000ml量筒.
8.準(zhǔn)備若干個標(biāo)準(zhǔn)品稀釋管.
注意事項(xiàng)
1.試劑準(zhǔn)備：所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫，使用后請立即按照說明書要求保存,。實(shí)驗(yàn)操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染,。
2．加樣：加樣時,，要控制加樣速度,，避免*孔與zui后一孔之見的時間間隔過大,，否則將會導(dǎo)致不同的預(yù)孵育時間，從而影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性以及重復(fù)性,；一般加樣時間控制在10分鐘內(nèi),，如果樣本數(shù)量過多，可使用多道移液器,。
3.孵育：樣品要在密閉的容器內(nèi)進(jìn)行孵育,，嚴(yán)格按照說明書上規(guī)定的孵育時間和溫度進(jìn)行。
4.洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中的殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,，同時要消除板底殘留的液體和手指痕跡,，避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù),。
5.反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如，10分鐘左右),，如果顏色較深,，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)。
6.建議實(shí)驗(yàn)前預(yù)測樣品含量,，如樣品濃度過高,，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋，計算結(jié)果時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù),。
7.建議使用本試劑盒時先做預(yù)實(shí)驗(yàn)(即先做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，試用幾個標(biāo)本)，如果對本試劑盒有任何疑問,，可和所購經(jīng)銷商,，如果因運(yùn)輸過程導(dǎo)致試劑盒失效，可要求調(diào)換,，但概不承擔(dān)產(chǎn)品本身以外的任何損失,。
人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)elisa試劑盒操作步驟
1. 取出試劑盒，于室溫(20-25℃)放置15-30分鐘,。實(shí)驗(yàn)過程應(yīng)在室溫(20-25℃)內(nèi)進(jìn)行,。
2. 取出酶標(biāo)板，按照標(biāo)準(zhǔn)品的次序分別加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中,。
3. 空白微孔中加入50μl的樣品,，空白對照加入50μl的蒸餾水；
4. 在樣品孔中加入10μl的生物素,；(不含空白對照孔,切忌：生物素只加樣品孔,！)
5. 在各孔中加入100μl的酶標(biāo)記溶液；(不含空白對照孔)
6. 將酶標(biāo)板用封口膠密封后,，37℃孵育反應(yīng) 1小時,；(在孵育箱中保持穩(wěn)定的溫度與濕度)
7. 充分清洗酶標(biāo)板3-5次，保持各孔有充足的水壓,；(濃縮洗滌液以1：100的比例與蒸餾水稀釋)
8. 酶標(biāo)板洗滌后用吸水紙*拍干,；
9. 各孔加入顯色劑A、B液各50μl；(不含空白對照孔)
10. 20-25℃下避光反應(yīng)15分鐘,；
11.各孔加入50μl終止液,，終止反應(yīng)；
人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)elisa試劑盒結(jié)果判斷
1. 30分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值,；
2. 以O(shè)D值為縱坐標(biāo),，以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，繪制曲線圖,；
3. 根據(jù)樣品的OD值查找對應(yīng)的濃度范圍,；