人心肌成纖維細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒說明書

檢測原理

本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標(biāo)準(zhǔn)品,、待測樣本加入到預(yù)先包被抗BB抗體（BBAb）透明酶標(biāo)包被板中,，溫育足夠時(shí)間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分,，再加入酶標(biāo)工作液,，溫育足夠時(shí)間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A,、B,，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色,，顏色的深淺與樣品中抗BB抗（BBAb）濃度呈正相關(guān),，450nm波長下測定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,，計(jì)算樣本中抗BB抗體（BBAb）含量,。

人心肌成纖維細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒操作步驟

1、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒,，室溫復(fù)溫平衡30分鐘,。

2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液,。

3,、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上,，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔,、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置,，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）,；空白對照孔不加,。

4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。

5,、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板4次（也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板）。

6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,，空白對照孔不加,。

7、溫育：重復(fù)4的操作,。

8,、洗板：重復(fù)5的操作。

9,、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min,。

10、終止：取出酶標(biāo)板,，每孔加終止液50μL,，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11,、測定：以空白孔調(diào)零,，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）,。

12,、計(jì)算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值，計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值,，在回歸方程上計(jì)算出對應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算,。zui終濃度為實(shí)際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。

人心肌成纖維細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒樣本要求

1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3）,，因?yàn)榀B氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑,。

2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立即試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3,、樣本應(yīng)充分離心,，不得有溶血及顆粒。

人心肌成纖維細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒注意事項(xiàng)

1、實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。

2、酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。

3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對照都做雙份檢測,，取平均值，以減小實(shí)驗(yàn)誤差,。

4,、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍，計(jì)算結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度,。

5,、本試劑盒定量范圍為0.1200ng/ml，超過此范圍,，為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計(jì)算所得,，不做為準(zhǔn)確定量結(jié)果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準(zhǔn)確結(jié)果（0.1200ng/ml范圍內(nèi)）,，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度,。

6、若顯色過淺,，可適當(dāng)延長底物溫育時(shí)間,。

7、為避免交叉污染,，標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本和空白對照每加一個(gè)就要更換一次吸頭；酶標(biāo)工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,，要懸臂加樣，不得碰到微孔,；不得重復(fù)使用封板膜,。

8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,，不同批號的試劑不得混用,。 

9、底物B對光敏感,，避免長時(shí)間暴露于光下,。