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開心果源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒技術(shù)參數(shù)
閱讀：74 發(fā)布時間：2021-2-5| 提 供 商 | 上海谷研實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 13.9KB |
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| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 74次 |
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開心果源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒說明書
概述：
熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增,，PCR產(chǎn)物不斷積累,，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實時的監(jiān)測,。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法,。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析,。
PCR實驗方法步驟：
方法：
1：在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油,。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min,，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min,。
3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油,，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油；否則,，直接取5-10μl電泳檢測,。
注意事項：
1．基礎(chǔ)程序；
2．?dāng)U增溫度和延伸溫度,；
3．反應(yīng)時間,；
4．循環(huán)次數(shù),；
5．PCR 反應(yīng)液的配制；
6．PCR技術(shù)的基本原理,；
7．PCR的反應(yīng)動力學(xué),；
8．PCR擴增產(chǎn)物；
9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件,。點擊了解更公司產(chǎn)品,。
熒光定量PCR服務(wù)：
簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,，而且與常規(guī)PCR相比,，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題,、自動化程度高等特點,，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異,；驗證基因芯片,，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù),，全部實驗皆使用進(jìn)口試劑完成,，主要定量PCR儀器。
1,、熒光定量PCR服務(wù)要求：
（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料,；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）,。
（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列,。
（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等
2、熒光定量PCR操作程序
（01）引物（探針）設(shè)計與合成,。
（02）提取DNA/RNA,，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。
（03）進(jìn)行Real Time PCR實驗,，進(jìn)行實驗結(jié)果分析,。
（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料,。
3,、熒光定量PCR的收費標(biāo)準(zhǔn)：
我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費標(biāo)準(zhǔn)。