合歡皮染料法PCR鑒定試劑盒說明書

產(chǎn)品名稱：合歡皮染料法PCR鑒定試劑盒
英文名稱：Cortex albiziae      
技術(shù)原理:
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑,。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝,。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈,。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子,，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制,。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷,、同時(shí)也大大降低了成本,，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床,。
使用及效果：
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘,，加入0.1 mL 溶液B,，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR 體積的1/10）作為模板進(jìn)行PCR,。剩余樣品可以放4℃保存,。
合歡皮染料法PCR鑒定試劑盒技術(shù)特點(diǎn)：
1準(zhǔn)確可靠，臨床雙盲對(duì)照試驗(yàn)＞1000例,，結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)測(cè)序法比對(duì),，結(jié)果*性大于99%。
2高靈敏：可檢測(cè)低至10ng的人基因組DNA,。
3快速：整個(gè)檢測(cè)流程只需3小時(shí),。
4簡(jiǎn)便：試劑盒提供預(yù)混好的試劑，使體系配置操作簡(jiǎn)便,。
5防污染
6產(chǎn)品僅用于科研高特異性：雙重特異性組成,，保證檢測(cè)結(jié)果的特異性和準(zhǔn)確性引物與DNA互補(bǔ)鏈結(jié)合必需*配對(duì)，才能延伸,。探針特異性與所檢測(cè)基因的PCR產(chǎn)物配對(duì),，在延伸中產(chǎn)生熒光。
產(chǎn)品及特點(diǎn)：
1. 即開即用,，用戶只需要提供伴放線放線桿菌樣品,。
2. 根據(jù)伴放線放線桿菌保守序列設(shè)計(jì)的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng),。
3. 靈敏度可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
4. 一管式熒光定量PCR檢測(cè),，避免后續(xù)污染,。
5. 產(chǎn)品僅用于科研本試劑盒足夠50次20μL反應(yīng)體系的熒光定量PCR。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織,、細(xì)胞,、血液、細(xì)菌等很多材料,，不同的樣本有不同要求,，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況,；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種,、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào),；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰,，也可以保存于Trizol液中,。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA,、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析,。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析,、基因分型,。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取,、cDNA合成,、qPCR
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則,；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性,；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵,。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的,。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,，結(jié)合的特異性大大增加,，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),，其特異性程度就更高,。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平,。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞,；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位),；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌,。
(3) 簡(jiǎn)便,、快速
合歡皮染料法PCR鑒定試劑盒PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后,，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,，不一定要用同位素,，無放射性污染、易推廣,。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液,、體腔液、洗嗽液,、毛發(fā),、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論,。
?運(yùn)輸及保存：
低溫運(yùn)輸,，-20℃保存，保存期限一年,。
自備試劑
DNA模板,、10×ROX（根據(jù)機(jī)型決定，具體見使用方法）,。