人支氣管上皮樣細(xì)胞介紹

從一位非癌個體的正常人支氣管上皮病理切片分離出上皮細(xì)胞,。這些細(xì)胞用腺病毒12-SV40病毒雜交病毒感染并克隆,。 DEAS-2B細(xì)胞保留了對血清反應(yīng)進(jìn)行鱗關(guān)分化的能力，并有用于篩選誘導(dǎo)或影響分化及致癌的化學(xué)或生物制劑,。細(xì)胞角蛋白及SV40抗原染色陽性,。

細(xì)胞特性

1）來源：肺;支氣管
2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
3）含量：>1x106 個/mL
4）污染：支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌檢測為陰性
5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存：使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞,。收到細(xì)胞后，可在1000RPM,，常溫條件下,，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清,，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，傳代達(dá)到細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，再進(jìn)行凍存,。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟,。

細(xì)胞用途：僅供科研使用。                     

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）上皮培養(yǎng)基（EpiCM-A: Sciencell 4131）；胎牛血清,，5%,；上皮生長因子1%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對于人支氣管上皮樣細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。

注意事項：

1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們,。

2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片,，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),，100*,，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況,。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù),。

3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),，故客戶需要售后時需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天,。

4.人支氣管上皮樣細(xì)胞所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護(hù),，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。