人支氣管上皮樣細胞介紹

從一位非癌個體的正常人支氣管上皮病理切片分離出上皮細胞。這些細胞用腺病毒12-SV40病毒雜交病毒感染并克隆,。 DEAS-2B細胞保留了對血清反應(yīng)進行鱗關(guān)分化的能力,，并有用于篩選誘導(dǎo)或影響分化及致癌的化學(xué)或生物制劑。細胞角蛋白及SV40抗原染色陽性,。

細胞特性

1）來源：肺;支氣管
2）形態(tài)：上皮細胞樣
3）含量：>1x106 個/mL
4）污染：支原體,、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存：使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞,。收到細胞后,，可在1000RPM，常溫條件下,，離心5min后,，于潔凈操作臺棄去上清,，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,，再進行凍存,。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

細胞用途：僅供科研使用,。                     

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）上皮培養(yǎng)基（EpiCM-A: Sciencell 4131）,；胎牛血清，5%,；上皮生長因子1%,。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3）凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度,。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于人支氣管上皮樣細胞,，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存,。

注意事項：

1.收到細胞后,，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細胞有污染,，請立即與我們。

2.收到細胞先不開瓶蓋,，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài),。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片,，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*,，200*各一張）,，觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù),。

3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境,、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài),，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,，期間間隔時間不能大于7天。

4.人支氣管上皮樣細胞所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。