人肝癌細(xì)胞特性：
1)來(lái)源：肝癌
2)形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
3)含量：>lxl06 個(gè)/mL
4)污染：支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
運(yùn)輸和保存：使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞,。收到細(xì)胞后,， 可在1000RPM，常溫條件下,，離心5min后,，于潔凈操作臺(tái)棄去上清，加入推薦 使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至l〇cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng) 狀態(tài)良好時(shí),，再進(jìn)行凍存,。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
細(xì)胞用途：僅供科研使用,。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1.準(zhǔn)備 RPIVM-1640 培養(yǎng)基(RPIVM-1640:GIBCO,貨號(hào) 31800022,添加 NaHC031.5g八, D-葡萄糖2.5g八,，丙酮酸鈉O.llg八)，90%;胎牛血清,，10%,。
2. 培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳,，5%,。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱 濕度為70%-80%,。
3.凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存,。
2)細(xì)胞處理：
復(fù)蘇細(xì)胞：將含有l(wèi)mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加 入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入l〇cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并檢 查細(xì)胞密度,。
細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。
力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培
養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部 分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止 消化,。
按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
將細(xì)胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3)細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),，棄
去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入約lml含血清的培養(yǎng)基后
加入凍存管中,，再添加1〇%DMSO后進(jìn)行凍存,。
人肝癌細(xì)胞注意事項(xiàng)：
收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰己揮發(fā)干凈,、凍存管瓶蓋脫落,、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立 即與我們,。
所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注 意防護(hù),，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄,。
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人肝癌細(xì)胞