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上海谷研實業(yè)有限公司資料大小
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冷凍速率是指降溫的速度,直接關(guān)系到冷凍效果,。細(xì)胞在冷凍過程中會發(fā)生如下變化:當(dāng)細(xì)胞被冷至-5℃時,,因溶液中加有冷凍保護(hù)劑而降低溶液的冰點(diǎn),細(xì)胞內(nèi)外溶液仍未結(jié)冰,;當(dāng)被冷至-5~-15℃之間時,,細(xì)胞外溶液先出現(xiàn)結(jié)冰而細(xì)胞內(nèi)仍保持未結(jié)冰狀態(tài)。細(xì)胞內(nèi)未結(jié)冰的水分子會比細(xì)胞外部分結(jié)冰溶液中的水分子具有更高的化學(xué)能,。其結(jié)果是,,細(xì)胞內(nèi)水分子為了和細(xì)胞外水分子保持化學(xué)能的平衡,會向細(xì)胞外流動,。冷凍速度不同,,細(xì)胞內(nèi)水分向外流動的情況也不相同:如果冷凍速度慢,,細(xì)胞內(nèi)水分外滲多,細(xì)胞脫水,,體積縮小,,細(xì)胞內(nèi)溶質(zhì)濃度增高,細(xì)胞內(nèi)不會發(fā)生結(jié)冰,;如果冷凍速度快,細(xì)胞內(nèi)水分沒有足夠的時間外滲,,結(jié)果隨著溫度的下降而發(fā)生細(xì)胞內(nèi)結(jié)冰,;如果冷凍速度非常快(即超快速冷凍),,則細(xì)胞內(nèi)形成的冰晶非常小或不結(jié)冰而呈玻璃狀態(tài)(玻璃化冷凍),。Luyet(1973)證實液體的凝固可分為兩種形式:一種是晶體化,溶液中的分子呈有序排列,;另一種情況是非晶體即玻璃化,液體中的分子呈無序狀態(tài),保持未凝固前的狀態(tài),。
不同的冷凍速度既然能使細(xì)胞內(nèi)發(fā)生不同的生理變化,,也可以對細(xì)胞產(chǎn)生不同的損傷。當(dāng)冷凍速度過慢時,,細(xì)胞脫水嚴(yán)重,,細(xì)胞體積嚴(yán)重收縮,超過一定程度時即失去活性,。同時冷凍速度過慢,,還會引起細(xì)胞外溶液部分結(jié)冰,從而使細(xì)胞外未結(jié)冰的溶液中溶質(zhì)濃度增高,,產(chǎn)生溶質(zhì)損傷,。當(dāng)冷凍速度過快時,細(xì)胞內(nèi)水分來不及外滲,,會形成較到冰晶,,造成細(xì)胞膜及細(xì)胞器的破壞,產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)冰晶損傷,。超快速玻璃化冷凍對細(xì)胞存活來說是zui為理想的冷凍方法,。細(xì)胞內(nèi)外呈玻璃化凝固,無冰晶形成或形成很小的冰晶,,對細(xì)胞膜和細(xì)胞器不致造成損傷,,細(xì)胞也不會在高濃度的溶質(zhì)中長時間暴露而受損。
不同細(xì)胞的zui適冷凍速率不同,。小鼠骨髓干細(xì)胞,、酵母、人紅細(xì)胞的zui適冷凍速率分別為1.6℃/min、7℃/min和200℃/min,。細(xì)胞與細(xì)胞之間的zui適冷凍速率可在1.6℃~300℃/min,,故對一種細(xì)胞進(jìn)行冷凍保存之前,首先需要測定其zui適冷凍速率,,以保證獲得zui高的冷凍存活率,。
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