1. 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(tái)(laminar flow) 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌，以70 %ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面,，并開(kāi)啟無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘后,，才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株,，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后,，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái),，以70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘以上后,，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作,。
2. 無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品,，例如試管架,、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出,，以利于氣流之流通,。實(shí)驗(yàn)用品以 70 % ethanol 擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無(wú)菌區(qū)域,，勿在邊緣之非無(wú)菌區(qū)域操作,。
3. 小心取用無(wú)菌之實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染,。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,，亦不要在打開(kāi)之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開(kāi)后,，以手夾住瓶蓋并握住瓶身,，傾斜約45° 角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面,。
4. 工作人員應(yīng)注意自身之安全,，須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于來(lái)自人類或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作,，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)之無(wú)菌操作臺(tái)(至少 Class II),。操作過(guò)程中，應(yīng)避免引起aerosol 之產(chǎn)生,，并避免尖銳針頭之傷害等,。
5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目： 5.1. CO2 鋼瓶之CO2壓力 5.2. CO2 培養(yǎng)箱之CO2濃度、溫度,、及水盤(pán)是否有污染(水盤(pán)的水用無(wú)菌水,，每周更換),。 5.3. 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)之a(chǎn)irflow 壓力，定期更換紫外線燈管及HEPA 過(guò)濾膜,，預(yù)濾網(wǎng)(300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng),，3000 小時(shí)/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒劑(Zephrin 1:750),，定期更換水槽的水
7. 認(rèn)真按照操作規(guī)程進(jìn)行實(shí)驗(yàn),，一般不大會(huì)導(dǎo)致污染，很多情況下是由于所用的試劑或培養(yǎng)基有污染而使實(shí)驗(yàn)失敗,，粉末培養(yǎng)基配制好后(加了血清),，一般在4度盡量不要超過(guò)1個(gè)月，如在-20度存放時(shí)間可長(zhǎng)一些,，但也不要超過(guò)3-4個(gè)月,，可能對(duì)于永生化細(xì)胞株來(lái)說(shuō)要求不是太高，但我在過(guò)去的4年里一直是作原代 細(xì)胞培養(yǎng) 的,，細(xì)胞嬌弱,，經(jīng)驗(yàn)表明放置時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。
8. 許多塑料制品也可以高壓消毒,，例如培養(yǎng)瓶蓋,，膠塞，吸頭等,。不能用于高壓的一般均已制成一次性作用的商品了,，當(dāng)然如果 money有限，如進(jìn)口的培養(yǎng)板,、皿等,，也可以重復(fù)使用1-2次，我當(dāng)時(shí)使用方法是將其*清潔后,，使用前在紫外燈下敞開(kāi)照射1-1.5h即可,，我做過(guò)多次，沒(méi)有出現(xiàn)問(wèn)題,。塑料培養(yǎng)瓶由于清洗消毒不便,，不要重復(fù)使用，如一定要重復(fù)用,，可用環(huán)氧乙烷等消毒,，(消毒后一定要放置半年以上方可使用)