細胞培養(yǎng)常用試劑使用問答

1.谷氨酰胺使用方法是什么?

答：谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,，故4℃下放置1周可分解50%,，使用中單獨配制,，置-20℃冰箱中保存,，用前加入培養(yǎng)液中,。

2.碳酸氫鈉在室溫條件存放是否穩(wěn)定?

答：碳酸氫鈉白色粉末,，或不透明單斜晶系細微結(jié)晶。比重2.159,。無臭,、味咸，可溶于水,，微溶于乙醇,。其水溶液因水解而呈微堿性，受熱易分解,，在65℃以上迅速分解,，在270℃時*失去二氧化碳，在干燥空氣中無變化,，在潮濕空氣中緩慢分解,。

3.培養(yǎng)細胞生長減慢的原因有哪些?其解決辦法有哪些?

答：可能得原因有：更換了不同的培養(yǎng)液或血清;培養(yǎng)液中一些細胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子等耗盡或缺乏或已被破壞;培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染;試劑保存不當;比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗找出可能的原因,。

解決辦法：增加起始培養(yǎng)細胞濃度;讓細胞逐漸適應新培養(yǎng)液;換入新鮮配制培養(yǎng)液;補加谷氨酰胺或生長因子等;用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng),，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物,，或用抗生素除菌;血清需保存在-5℃到-20℃;培養(yǎng)液需在2-8℃避光保存;含血清*培養(yǎng)液在2-8℃保存,，并在2 周內(nèi)用完;分離培養(yǎng)物，檢測支原體,。

4.L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)中重要嗎?它在溶液中不穩(wěn)定嗎?

答：L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時非常重要的,。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的能量來源,、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝,。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解，降解率隨保存溫度而變,。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成,，而氨對于一些細胞具有毒性。

5.細胞傳代消化時所用胰酶濃度越高越好嗎?

答：不見得!因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH,、溫度,、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關,。通常情況下，pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用能力zui強,。另外,，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力,。我們每次進行傳代消化前,，一定要用D-Hanks液或PBS液反復沖洗細胞培養(yǎng)瓶，以便于將含血清的培養(yǎng)基沖洗干凈,，這樣就能大大提高消化液的消化能力,。通常使用的消化液濃度為：

(1)0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA;

(2)0.25% 胰蛋白酶

多數(shù)細胞傳代消化可使用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA這種消化液。

6.二價離子抑制胰蛋白酶活性嗎?使用胰蛋白酶時加入EDTA的目的是什么?

答：二價離子的確抑制胰蛋白酶活性,。EDTA用來螯合游離的鎂離子和鈣離子,，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前,，用EDTA清洗細胞,，以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子,。

7.GlutaMAX-I是什么?培養(yǎng)細胞如何利用GlutaMAX-I?這個二肽有多穩(wěn)定?

答：GlutaMAX-I 即谷丙氨酸二肽,，是一個L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來保護,。一種肽酶逐漸裂解二肽,，釋放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定,，即使在121磅滅菌20分鐘,，GlutaMAX-I 二肽溶液有zui小的降解，如果在相同條件下,，L-谷氨酰胺幾乎*降解

8.培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么?

答：丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源,，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是,，如果沒有葡萄糖的話,，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。

9.Hank′s 平衡鹽溶液(HBS)和Earle′s平衡鹽溶液(EBS)有什么本質(zhì)的功能差別?

答：HBS和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Eagle′s (2.2g/L)中比在Hanks′ (0.35g/L) 中高,。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,，以維持溶液的PH值。Eagle′s液在空氣水平的CO2 中,，溶液會變堿,，Hanks′液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存組織,，需要用Eagle′s液,。如果僅僅是清洗將要在細胞培養(yǎng)基中儲存的組織,，用Hanks′液就可以了。