發(fā)酵支原體PCR檢測試劑盒準(zhǔn)備試劑與收集血樣：

雙重核酸試劑盒（熒光PCR法）　1.  收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA 、檸檬酸鹽,、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿等盡早檢測,， 2-8 ℃ 保存48 小時；更長時間須冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存,，避免反復(fù)凍融,。

2.  標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml 蒸餾水 混勻，配成 120 0ng/ml 的溶液 ,。 設(shè)標(biāo)準(zhǔn) 管 8 管,，管加標(biāo)本稀釋液 900ul ，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液 500ul ,。在管中加入 120 0ng/ml 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液 100ul 混勻后用加樣器吸出 500ul ,，移至第二管 。如此反復(fù)作對倍稀釋,，從第七 管 中吸出 500ul 棄去,。第八 管 為空白對照。

3.  10× 標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃稀釋液 +9ml 蒸餾水）,。

4.  洗滌液：用重蒸水 1:20 稀釋（示例：1ml 濃縮洗滌液加入 19ml 的重蒸水）

檢測程序：

1.  加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品 100ul ,，將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌 4-6 次,，向濾紙上印干,。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應(yīng)板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘,。

4.  洗板：同前,。

5.  每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul 。將反應(yīng)板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

6.  洗板：同前,。

7.  每孔加入底物工作液100ul ,，置 37   ℃ 暗處反應(yīng)15 分鐘。

8.  每孔加入100ul 終止液混勻,。

9.  30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在 45 0 nm 處測 吸光值,。

性能：

1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900,。

2. 靈敏度：檢測濃度小于0.1 U/mL,。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%,。

5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存,。

6. 有效期：6個月

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