ATP依賴性DNA連接酶Ⅰ(LIG1)重組蛋白人操作步驟：

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑,， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,，混勻,。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,，剪碎成3mm×3mm左右的小塊,，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer,，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次,，注意低溫操作,；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min,；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法,、BCA法）,；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞,，吸去培養(yǎng)基后,，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液,；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞,，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑,， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用,。

4． 細(xì)胞洗滌后,，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

小鼠胱天蛋白酶5(CASP-5)ELISA KitMouse Caspase-5,CASP5 ELISA kit

小鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA KitMouse Caspase 3,Casp-3 ELISA Kit

小鼠胱天蛋白酶10(CASP-10)ELISA KitMouse Caspase-10,CASP10 ELISA kit

小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)ELISA KitMouse Bone morphogenetic protein 6,BMP-6 ELISA Kit

小鼠骨形成蛋白(BMPs)ELISA KitMouse bone morphogenetic proteins,BMPs ELISA Kit

小鼠骨涎蛋白(BSP)ELISA KitMouse Bone sialoprotein,BSP ELISA kit

小鼠骨特性堿性磷酸酶C端肽ELISA KitMouse C-terminal peptide of bone-specific alkaline phosphatase ELISA kit

小鼠骨特性堿性磷酸酶(BALP)ELISA KitMouse Bone-specific alkaline phosphatase,BALP ELISA kit

小鼠骨成型蛋白9(BMP-9)ELISA KitMouse bone morphogenetic protein 9,BMP-9 ELISA Kit

小鼠骨成型蛋白15(BMP-15)ELISA KitMouse Bone Morphogenetic Protein 15,BMP-15 Elisa kit

小鼠谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)ELISA KitMouse glutathione peroxidase,GSH-Px ELISA Kit

小鼠谷氨酸脫羧酶自身抗體IgM(GAD-Ab-IgM)ELISA KitMouse glutamic acid decarboxylase autoantibody IgM,GAD-Ab-IgM ELISA Kit

小鼠谷氨酸脫羧酶自身抗體IgG(GAD-Ab-IgG)ELISA KitMouse glutamic acid decarboxylase autoantibody IgG,GAD-Ab-IgG ELISA Kit

小鼠谷氨酸脫氫酶(GDH/GLDH)ELISA KitMouse Glutamate dehydrogenase,GDH/GLDH ELISA Kit

小鼠孤腓肽(OFQ/N)ELISA KitMouse orphanin FQ/nociceptin,OFQ/N ELISA Kit

小鼠鉤端螺旋體IgG(Lep IgG)ELISA KitMouse Leptospira antibody(IgG)ELISA Kit

小鼠高鐵血紅蛋白(MHB)ELISA KitMouse Methemoglobin,MHB ELISA Kit

小鼠高爾基蛋白73(GP-73)ELISA KitMouse golgi protein 73,GP-73 ELISA Kit

小鼠高半胱氨酸(Hcy)ELISA KitMouse Homocysteine,HCY ELISA Kit

小鼠肝脂酶(HL)ELISA KitMouse hepatic lipase,HL ELISA Kit