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1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,,在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,,然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,,混勻,;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,,再在第三,、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻,;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,,再各取50μl分別加到第五,、第六孔中,再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻,;混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中,再在第七,、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中,,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,,120 ng/L ,,60 ng/L,30 ng/,,15 ng/L)。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用,。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外,。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘,。
腺病毒早期E1A蛋白抗體
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
磷酸化失調(diào)癥蛋白1抗體
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體
胞質(zhì)乙醛脫氫酶1抗體
ADP核糖基化樣因子ARL3抗體
花生四烯酸15脂氧合酶1抗體
乳腺癌增強(qiáng)蛋白2抗體
α1微球蛋白抗體
α晶狀體球蛋白B/αB-crystallin抗體
腺苷A2b受體/神經(jīng)生長(zhǎng)因子1受體抗體
AMPK的相關(guān)蛋白激酶5抗體
致瘤磷蛋白32相關(guān)蛋白1抗體
腺苷脫氨酶抗體
含錨蛋白重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族4抗體
ATRNL1蛋白抗體
AFP4a蛋白抗體
鐵蛋白Fe65樣蛋白1抗體
鐵蛋白Fe65樣蛋白2抗體
β淀粉樣蛋白前體蛋白結(jié)合蛋白2抗體
早老素穩(wěn)定因子樣蛋白/γ分泌酶組件蛋白APH1抗體
磷酸化蛋白激酶AKT1抗體
磷酸化蛋白激酶AKT1抗體
ASH1L蛋白抗體
α2C-AR腎上腺素能受體抗體
中心體蛋白AZI1抗體
α蛋白激酶3抗體(心?。?/p>
表皮型脂氧合酶3抗體(魚鱗病相關(guān)蛋白)
錨蛋白重復(fù)域28抗體
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