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1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,,在di一,、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,,然后在di一,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻,;然后從di一孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三,、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,,再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻,;混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,,再在第七,、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,,120 ng/L ,,60 ng/L,30 ng/,,15 ng/L),。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同),、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用,。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外,。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘。
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
磷酸化細(xì)胞周期末期促進(jìn)復(fù)合蛋白APC1抗體
發(fā)育分化增強(qiáng)因子1抗體
磷酸化發(fā)育分化增強(qiáng)因子1抗體
蛋白激酶B3
肌動蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體
蛋白激酶A2抗體
血管緊張素Ⅱ受體2抗體
ASH1蛋白抗體
芳香乙酰胺脫乙?;笜拥鞍?抗體
血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移蛋白抗體
醛糖還原酶相關(guān)蛋白質(zhì)抗體
膽汁酸結(jié)合蛋白DDH2抗體
血管生成素樣蛋白3抗體
甘油酯激酶線粒體抗體
磷酸化內(nèi)收蛋白a1抗體
自噬體ATG16L2蛋白抗體
睪丸酸性磷酸酶抗體
酸性磷酸酶抗體
極光激酶A相互作用蛋白1抗體
載脂蛋白樣蛋白6抗體
凋亡相關(guān)蛋白TGFb信號抗體
A2LD1蛋白抗體
α1,4-N-乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶α4Gn-T抗體
芳香乙酰胺脫乙?;缚贵w
芳香乙酰胺脫乙酰基酶樣蛋白4抗體
氨基乙二酸半醛脫氫酶磷酸泛酰巰基乙胺轉(zhuǎn)移酶抗體
賴氨酸酮戊二酸還原酶抗體
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