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小鼠垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)elisa試劑盒?操作步驟

時間:2021/9/14閱讀:183
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小鼠垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)elisa試劑盒操作步驟:


1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,,在di一,、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,,然后在di一,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,,混勻,;然后從di一孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,,混勻,;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五,、第六孔中,,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,,混勻,;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中,,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,,混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,,濃度分別為180 ng/L,,120 ng/L ,60 ng/L,,30 ng/,,15 ng/L)。

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同),、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,拍干,。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3,。

8. 洗滌:操作同5,。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色),。

11. 測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘,。

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