小鼠雜交瘤細(xì)胞；EphB3培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),，90%,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%,。

2,、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%,；二氧化碳,，5%。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。

3、凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存,。

二,、細(xì)胞處理：

1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2,、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：

1)棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。

2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

BY4742 Chemically Competent Cell100μl×10支

R5421 Chemically Competent Cell100μl×10支

EGY48 Chemically Competent Cell100μl×10支

EGY194 Chemically Competent Cell100μl×10支

EGY188 Chemically Competent Cell100μl×10支

EGY40 Chemically Competent Cell100μl×10支

RFY206 Chemically Competent Cell100μl×10支

Y190 Chemically Competent Cell100μl×10支

YM4271 Chemically Competent Cell100μl×10支

GV3101感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）10×100ul

GV3101感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）50×100ul

GV3101(pSoup)感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）10×100ul

GV3101(pSoup)感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）50×100ul

GV3101(pSoup-p19)感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）10×100ul

GV3101(pSoup-p19)感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）50×100ul

EHA105感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）10×100ul

EHA105感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）50×100ul

EHA105(pSoup)感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）10×100ul

EHA105(pSoup)感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）50×100ul

AGL1感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）10×100ul