大鼠骨髓瘤細(xì)胞,；Y3-Ag 1.2.3生長(zhǎng)特性復(fù)蘇操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管,，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基,。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,，裝滿37℃的水,，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管,，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,，使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中,，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染,。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),，輕輕吹打液體,，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度,，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡,。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi),。

4）800rpm離心5min,，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基,，吹打制成細(xì)胞懸液,。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞,。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代,。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代,，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

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K12 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞5×50ul

K12 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞20×50ul

BL21感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）10×100ul

BL21感受態(tài)細(xì)胞(化學(xué)轉(zhuǎn)化法或熱激法）50×100ul