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兔子補體蛋白4 ELISA試劑盒操作步驟

時間:2021/6/8閱讀:113
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兔子補體蛋白4 ELISA試劑盒操作步驟:

1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔,在di一、第二孔中分別加標準品100μl,,然后在di一,、第二孔中加標準品稀釋液50μl,,混勻,;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,,再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,,再各取50μl分別加到第五,、第六孔中,再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,,混勻;混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中,再在第七,、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,,120 ng/L ,,60 ng/L,30 ng/,,15 ng/L),。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同),、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外,。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘。

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