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鎖陽LAMP鑒定試劑盒的反應(yīng)條件:
因擴增片段的大小、反應(yīng)體積,、使用擴增儀器的不同而不同,。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小,設(shè)定25~30個循環(huán),。
如果循環(huán)次數(shù)太少,,擴增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,,則會出現(xiàn)Smear,。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進行)。另外,,由于在60~68℃間,,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,,每kbp大體可設(shè)定30秒~1分鐘,;當溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常,,Anneal溫度太高,,有時會得不到擴增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時,,容易發(fā)生非特異性反應(yīng),。另外,Extension時間太短時,,會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成,;而Extension時間太長時,會出現(xiàn)Smear,。
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集,、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,,收集血液后,,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清,。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清,。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,,凍存于-20℃,,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
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