小鼠肝炎病毒PCR檢測試劑盒試劑的準(zhǔn)備：

1. DNA模板

2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中,，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,，而不能從無到有,，憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物,?？梢允荄NA也可以是RNA,，一般20多bp,，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP,、dCTP、dGTP,、dTTP各2mM

5．Taq酶操作步驟 

1．在冰浴中,，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。

      10×PCR buffer             5μl

      dNTP mixl                 4μl

       引物1（10pM）               2μl

       引物2（10PM）              2μl

       Taq酶（2U/μl）            1μl

      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl

      加ddH2O至               50 μl

    視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油,。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序,。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上,，執(zhí)行擴(kuò)增,。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,，循環(huán)30-35次,，后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng),，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。

4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,，以除去石蠟油,；否則，直接取5-10μl電泳檢測,。

 特點(diǎn)：
1. 即開即用,，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單,，定量準(zhǔn)確快速,。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強(qiáng),。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp,。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳,。
4. 提供陽性對照,，便于分析試驗(yàn)結(jié)果。