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兔黏液瘤病毒(RMV)核酸檢測(cè)試應(yīng)液的配制

時(shí)間:2020/10/28閱讀:311
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兔黏液瘤病毒(RMV)核酸檢測(cè)試應(yīng)液的配制:

PCR反應(yīng)體系的配置方式有時(shí)也會(huì)影響反應(yīng)的正常進(jìn)行,。常規(guī)方法與其它酶學(xué)反應(yīng)一樣,,在后加入DNA聚合酶,。早期的PCR儀沒(méi)有帶加熱的蓋子,要求在反應(yīng)液上覆蓋一層礦物油,,防止水分蒸發(fā)。

對(duì)于使用具3’-5’外切活性的高溫DNA聚合酶時(shí),,有時(shí)會(huì)擴(kuò)增不出產(chǎn)物。在遇到這個(gè)問(wèn)題時(shí),,如果將反應(yīng)成分分開(kāi)配制,A管含模板,、引物和dNTP,以及調(diào)整體積的H2O,,B管含緩沖液、DNA聚合酶和水,,然后再將兩管溶液混合起來(lái),,可較好地克服這個(gè)問(wèn)題,。

按照常規(guī)的方法配制反應(yīng)體系,有時(shí)會(huì)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增的問(wèn)題,。熱啟動(dòng)(hotstart)PCR操作方式可較好解決這一問(wèn)題,。將dNTP,、緩沖液,,Mg2+和primer先配制好,然后加入一粒蠟珠(如AmpliWaxPCRQam100),,加熱熔化,再冷卻,,使蠟將溶液封住,后加入模板和DNA聚合酶等剩余成分,。只有當(dāng)PCR反應(yīng)進(jìn)入高溫階段后,蠟層熔化,,所有反應(yīng)成分才會(huì)混合在一起。

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