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猴子血小板因子4試劑盒試驗(yàn)時注意事項(xiàng)

時間:2020/9/2閱讀:138
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猴子血小板因子4試劑盒試驗(yàn)時,,注意事項(xiàng)如下: 

     1. 正式試驗(yàn)時,,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗(yàn)條件,,待檢樣品應(yīng)作一式二份,,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高,,說明有非特異性反應(yīng),,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉,。 
     2. 在ELISA中,,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括: 
     (1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,,如聚氯乙烯,、聚苯乙烯,、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板,、試管,、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),,觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。 
     (2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時,。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,,在其它試驗(yàn)條件相同時,,觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度,。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml,。 
     (3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物,、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度,。 
     (4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全,、有明顯地顯色反應(yīng),,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,,應(yīng)注意防護(hù),。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體,。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng),。通常底物作用時間,,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,,尤其是H2O2在臨用前加入 

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