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猴子血小板因子4試劑盒試驗時注意事項

時間:2020/9/2閱讀:172
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猴子血小板因子4試劑盒試驗時,,注意事項如下: 

     1. 正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,,待檢樣品應(yīng)作一式二份,,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高,,說明有非特異性反應(yīng),,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉,。 
     2. 在ELISA中,,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括: 
     (1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,,如聚氯乙烯,、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板,、試管、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,,在同一實驗條件下進行反應(yīng),,觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。 
     (2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時,。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,,在其它試驗條件相同時,,觀察陽性標(biāo)本的OD值,。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml,。 
     (3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份),。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度,。 
     (4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉,、安全、有明顯地顯色反應(yīng),,而本身無色,。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護,。有條件者應(yīng)使用不致癌,、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體,。底物作用一段時間后,,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,,以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 

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